声明
引言
第1章细胞周期蛋白依赖性激酶CTDK-Ⅰ及其亚基的功能介绍
1.2 CTK1亚基的功能
1.3 CTK2与CTK3亚基的功能
第2章共表达体系
2.1 多载体表达模式
2.2 单载体表达模式
第3章实验材料和方法
3.1 酵母基因组提取
3.2 CTK3，CTK2和CTK1的基因扩增
3.3 PCR扩增产物回收
3.4 双酶切反应
3.5 连接反应
3.6 大肠杆菌感受态制备
3.7 原核表达载体转化感受态
3.8 阳性克隆鉴定
3.9 质粒抽提
3.10 突变位点的回复突变
3.11 生物信息学分析
3.12 蛋白的表达
3.12.1 小剂量表达
3.12.2 批量发酵
3.13.1 Ni2+-NTA柱亲和层析
3.13.2 Superdex200凝胶过滤色谱层析
3.13.3 HiTrap-QFF离子交换层析
3.13.4 再次Superdex200纯化蛋白
3.14 纯化蛋白浓度测定
3.15 CTK2-CTK3蛋白质的组成成分确定
3.16 CTK3-CTK2蛋白结晶的生长
3.17 晶体的优化
3.18 蛋白晶体X-ray衍射数据收集，处理与结构解析的尝试
3.19 硒代甲硫氨酸蛋白的制备
3.20 硒代甲硫氨酸蛋白纯化
3.21 硒代甲硫氨酸蛋白晶体筛选
3.22 CTK1表达载体构建
3.23 CTK1蛋白表达与纯化
第4章实验结果
4.1 原核表达载体构建
4.1.2 单载体重组质粒的构建
4.1.3 CTDK-Ⅰ三个亚基蛋白的物化性质分析
4.1.5 CTDK-Ⅰ亚基蛋白CTK1功能域的分析
4.1.6 亚基蛋白CTK1二级结构预测
4.2 小剂量表达实验
4.3 CTDK-Ⅰ亚基蛋白异二聚体复合物的表达与纯化
4.4 蛋白复合物的组成测定
4.5 CTK2-CTK3蛋白晶体筛选与优化
4.6 CTK2-CTK3蛋白晶体的衍射数据收集与处理
4.7 CTK3-CTK2晶体结构模型解析初步尝试
4.8 硒代甲硫氨酸CTK3-CTK2蛋白纯化
4.9 硒代CTK3-CTK2蛋白晶体筛选
4.10 CTK1单体蛋白的表达与纯化
第5章讨论
5.1 CTK2-CTK3复合物及CTK3的单体表达研究
5.2 硒代甲硫氨酸CTK3-CTK2表达研究
5.3 CTK1氨基酸序列分析
5.4 CTK1的表达研究
小结
第6章展望
参考文献
附录1.p28质粒图谱
附录2.常用试剂配方
在学研究成果
致 谢
宁波大学;
