酵母RNA聚合酶ⅡRpb2和Rpb3两亚基间相互作用位点的定位

摘要

为研究S.pombeRNA polⅡ各亚基间体内装配成复合体的机制,本文首次用酵母双杂交系统鉴定了Rpb2和Rpb3两亚基间体内相互作用的位点.首先将Rpb2的4个片段克隆至Gal4 BD表达载体pAS2上,构建BD-Rpb2片段融合蛋白重组质粒;同时将Rpb3克隆至Gal4AD表达载体pGADGH上,构建AD-Rpb3融合蛋白重组质粒.其次,将pGADGHRpb3分别与pAS2Rpb2各片段重组质粒共转化到受体酵母菌Y190感受态细胞内,筛选并鉴定β-gal活性阳性(β-gal+)的共转化子.最后,将β-gal++共转化子中的Rpb2片段进行序列分析并进行同源序列比较确定其在Rpb2中的位置.结果表明,Rpb2与Rpb3相互作用的位点位于Rpb2的902～989aa肽段内.