富马酸高效合成丝状真菌细胞工厂构建

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声明

摘要

1 前言

1．1富马酸概述

1．1．1富马酸的理化指标

1．1．2富马酸的应用领域

1．1．3富马酸的生产途径

1．2．1合成富马酸的代谢途径

1．2．2产富马酸的菌株

1．2．3合成富马酸途径的关键酶-富马酸酶

1．2．4 C4二羧酸转运蛋白

1．3嗜热毁丝霉的研究进展

1．3．1嗜热毁丝霉的生物学特性

1．3．2嗜热毁丝霉的应用研究

1．3．3嗜热毁丝霉转录组学分析

1．4本课题的研究内容及意义

1．4．1本课题的研究内容

1．4．2本课题的研究意义

2．1．1实验仪器

2．2常用培养基和缓冲液的配制

2．3实验方法

2．3．1构建质粒

2．3．2质粒提取

2．3．3嗜热毁丝霉基因组DNA的提取方法

2．3．4嗜热毁丝霉总RNA的提取及纯化

2．3．5基因拷贝数鉴定

2．3．6嗜热毁丝霉原生质体转化

2．3．7发酵过程中富马酸含量的测定

2．3．8嗜热毁丝霉转化子验证

2．3．9蛋白质及富马酸酶活性测定

2．3．10生物量的测定

3结果与讨论

3．1通过引入C4-二羧酸转运蛋白促进富马酸的分泌

3．2富马酸合成关键酶----富马酸酶基因筛选

3．3通过减少富马酸代谢支路提高其产量

3．4提高细胞内苹果酸浓度促进嗜热毁丝霉富马酸合成

3．4．1敲除moc和mae提高富马酸的产量

3．4．2测定胞内L-苹果酸的浓度

3．5．1在SG424菌株过表达Mtsfc及测定拷贝数

3．5．2测定生物量

4结论

5展望

参考文献

7攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢