调理脾胃针法对糖尿病肾病患者淋巴细胞损伤修复机制的研究

摘要

目的：　　观察调理脾胃针法对于糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)患者淋巴细胞损伤的修复作用，并从基因层面初步探讨其分子机制，以期为针刺防治DN提供有力依据。　　方法：　　以DN患者为研究对象，收集2014年1月至2015年1月就诊于天津市中医药研究院附属医院的住院患者60例，按随机数字表法分为观察组、对照组各30例。两组病人在基础治疗的前提下，观察组施以调理脾胃针法，对照组按照传统针刺取穴，每日2次，6天为一疗程，休息1天后，继续第二个疗程，共计4周。　　（1）分别与治疗前及治疗4周后取血，并运用流式细胞技术观察两组患者血液内CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+含量，并从血液中提取淋巴细胞，采用酶联免疫吸附法检测淋巴细胞丙二醛(MDA)、羰基（PCO）、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量，运用分光光度法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活性。　　（2）选择观察组治疗前后共8个淋巴细胞样本，并用全基因组芯片检测基因表达谱变化，并进行差异表达基因、本体论（GO）、信号通路分析。　　结果：　　1.两组患者在性别、年龄、病程、体重指数、糖化血红蛋白、收缩压、舒张压、血肌酐、尿白蛋白排泄率比较，差异均无显著性意义(P>0.05)，说明2组之间具有齐同可比性。　　2.两组患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+治疗前比较，差异无显著性意义（P>0.05)；而观察组治疗后CD4+、CD4+/CD8+比值较治疗前明显降低，差异有非常显著性意义(P<0.01)，CD8+、CD3+较治疗前明显升高，差异有非常显著性意义(P<0.01)；而对照组治疗后CD8+、CD3+亦较治疗前有明显升高(P<0.01，P<0.05)，CD4+、CD4+/CD8+比值较治疗前明显降低(P<0.01)；两组治疗后比较，CD8+和CD4+/CD8+差异有显著性意义(P<0.05)。说明两种针法均可以调节T淋巴细胞亚群数量，但是调理脾胃针法较传统针刺法更有效。　　3.两组患者淋巴细胞8-OHdG、PCO、MDA、SOD、GSH-PX、CAT治疗前比较，差异无统计学意义（P>0.05）；观察组治疗后MDA、8-OHdG较治疗前降低，差异有非常显著性意义(P<0.05，P<0.01)；SOD、GSH-PX、CAT较治疗前升高，均有显著性差异（P<0.05，P<0.01）；PCO无明显变化（P>0.05）；而对照组治疗后8-OHdG较治疗前降低，有显著性差异（P<0.01），GSH-PX、CAT、SOD较治疗前升高，比较有非常显著性差异（P<0.05，P<0.01），MDA和PCO无明显变化（P>0.05）；2组治疗后比较，CAT差异有非常显著性意义（P<0.01）。　　4.观察组治疗前后之间差异基因数量为46条，其中表达上调的有18条，下调的有28条。68个GOs被上调的差异基因调节，159个GOs被下调的差异基因调节。上调的差异基因共调控5条信号通路，包括谷胱甘肽代谢、细胞因子受体相互作用等；下调的差异基因共调控40条信号通路包括1型糖尿病、PPAR信号通路、TGF-β信号通路、HIF-1信号通路、T细胞受体信号通路、Jak-STAT信号通路、老年性痴呆、系统性红斑狼疮等。　　结论：　　DN患者存在淋巴细胞损伤，调理脾胃针法能够增强自由基清除能力，降低DNA氧化损伤，调节T淋巴细胞亚群数量及活性异常，从而改善淋巴细胞免疫表达，修复淋巴细胞损伤，进而改善肾功能，延缓了肾损害。其作用机制是多基因、多信号通路参与的，其中与IFNG及其调节的相关信号通路关系密切。

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综述：中医药治疗糖尿病肾病的临床及机理研究进展

前言

研究一调理脾胃针法对DN患者淋巴细胞损伤的修复作用研究

1 临床资料

2 研究方法

3 结果与分析

4 小结

研究二基于基因表达谱分析的调理脾胃针法修复DN 患者淋巴细胞损伤的分子机制研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 小结

讨论

1 现代医学对糖尿病肾病的认识

2 中医学对糖尿病肾病的认识

3 导师对糖尿病肾病的阐释

4 本课题研究结果分析

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表论文情况