两轮荧光原位杂交技术在种植前遗传学诊断中的应用

摘要

本文主要从以下几个部分进行了论述：
　　目的:在废弃胚胎中应用一快速、简便的单细胞核固定和两轮FISH检测技术,探究其可行性,同时分析植入前胚胎中非整倍体和嵌合体的发生情况。方法:收集本中心行IVF或ICSI不适合移植的第3天废弃胚胎24枚,每枚胚胎的卵裂球数目不少于4,在显微操作采用激光打孔法在胚胎透明带上打出合适的孔,然后用活检针对胚胎进行活检,使培养皿液滴中出现单个分散卵裂球。每个胚胎活检2~3个卵裂球转移至防脱载玻片上,采用HCL/Tween20方法进行核固定,核固定后,应用两轮FISH方法对8种关键染色体:13,15,16,18,21,22,X和Y进行分析,计算杂交成功率并分析非整倍体和嵌合体的发生情况。结果:两轮FISH均能见到较清晰的杂交信号;24枚胚胎共活检72个卵裂球,固定到69个核,核的固定成功率为95.8％,69个核中65个核信号诊断明确,其FISH杂交成功率为94.2%;24枚胚胎中,正常胚胎6枚,异常胚胎18枚,18枚异常胚胎中,多倍体胚胎2枚,单倍体胚胎1枚,非整倍体胚胎8枚,嵌合体胚胎7枚。结论:两轮荧光原位杂交方法在植入前第3天的废弃胚胎中成功地被应用,具有简单、快速、准确等特点。
　　目的:探究此两轮FISH技术、卵裂球活检以及核固定方法应用于临床16个PGD周期的可行性。方法:采用本中心常规控制性超排卵方案排卵,取卵后行卵母细胞浆单精子注射,受精第3天对胚胎发育情况进行观察,选择正常受精来源、胚胎卵裂球数目在6细胞以上,胚胎碎片20%以内的胚胎行卵裂球活检。采用HCL/Tween20方法进行核固定。根据患者染色体情况选择相应探针进行荧光原位杂交,活检后的胚胎转入囊胚期胚胎培养液(Cook,USA)中继续培养。最后根据FISH结果和第5天胚胎发育情况选择合适的胚胎移植。结果:16个周期共对染色体组成正常或平衡的27个胚胎进行宫腔内移植,共获得4例妊娠,妊娠成功率为25%。1例14天测尿HCG(+),现正在等待35天B超结果;另3例除1例为异位妊娠外,另2例均为正常单胎妊娠:1例患者尚在妊娠之中,另1名患者现已足月分娩一健康女婴,体重2800g,该婴儿为安徽省第一位通过“FISH法”种植前遗传学诊断技术诞生的染色体易位患者的后代。结论:说明通过此方法帮助具有高遗传风险夫妇获得健康后代是可行的,同时也说明本中心已具备开展PGD的能力。

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引 言

第一部分两轮荧光原位杂交技术应用的初步研究

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 结论

第二部分FISH技术在胚胎植入前遗传学诊断中的临床应用

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

5 讨论

6 结论

参考文献

附 图

附 录

致谢

综述