利用荧光原位杂交技术进行胚胎种植前遗传学诊断的研究及初步临床应用

摘要

目的:1.建立安全、可行的胚胎活检方法;2.建立准确、可靠、稳定的可以应用于胚胎种植前遗传学诊断的FISH技术;3.利用荧光原位杂交技术对多元核发育而成的胚胎进行研究,分析多元核发育而成的胚胎染色体的异常性;4.利用荧光原位杂交技术对发育迟缓和胚胎碎片多的胚胎进行21号染色体分析,探讨21号染色体非整倍性与胚胎形态学指征的相关性;5.将荧光原位杂交技术应用于临床的胚胎种植前遗传学诊断.结论:1.酸性Tyrode's打孔法活检成功率高于机械切割打孔法,而且酸性Tyrode's打孔法操作较机械切割打孔法简单易掌握,决定在以后实验中以酸性Tyrode's打孔活检方法为主要的活检方法.2.在所选用和改进的方法步骤进行荧光原位杂交,结果显示,其方法稳定、杂交率高,与国外报告文献结果相似,可以作为PGD研究和临床应用的方法.3.IVF受精和ICSI受精的3PN胚胎发育有差异,证明IVF受精和ICSI受精的3PN中的原核的来源是不同,导致胚胎第一次卵裂的方式也不同.IVF受精和ICSI受精的3PN胚胎的性染色体的异常率非常高,正常二倍体出现的比例极低,分别为:3.17﹪和2.94﹪.因此,在胚胎移植时多原核发育成的胚胎必须淘汰 4.胚胎卵裂的速度和胚胎碎片的多少与胚胎内部染色体的非整倍性存在着相关性.目前在不损伤胚胎的前提下还不能对胚胎的染色体进行全面的分析时,在选择胚胎移植,有必要选择形态和卵裂速度都正常的胚胎.5.利用FISH技术进行PGD治疗9周期,获得2例妊娠,说明该中心也具备了开展PGD临床应用的基础和能力.

目录

缩略词表

前言

第一部分应用小鼠胚胎比较两种胚胎活检方法

材料和方法

结果

讨论

第二部分胚胎单细胞间期核的荧光原位杂交方法的建立

材料与方法

结果

讨论

第三部分应用荧光原位杂交技术对多元核发育而成的胚胎进行性染色体异常性的研究

材料与方法

结果

讨论

第四部分早期胚胎形态学与21号染色体非整倍性相关性的研究

材料与方法

结果

讨论

第五部分利用荧光原位杂交技术进行胚胎种植前遗传学诊断的临床应用

材料与方法

结果

讨论

全文小结

插图

参考文献

致谢

文章