腺病毒介导ING4基因抑制大肠癌细胞增殖及其分子机制

摘要

目的:探讨腺病毒介导ING4基因抑制大肠癌细胞增殖及其分子机制。
　　方法:采用重组腺病毒载体ING4(Ad-ING4)感染QBI-293A细胞,进行病毒扩增和效价测定。RT-PCR鉴定Ad-ING4基因在QBI-293A细胞和SW1116大肠癌细胞中的有效表达。体外实验分5组:细胞对照PBS组(PBS组)、空载体腺病毒组(Ad-GFP组)、Ad-ING4基因治疗组(Ad-ING4组)、紫杉醇对照组(PTX组)和Ad-ING4+PTX组(联合组)。Western blot鉴定ING4蛋白表达,检测STAT3、磷酸化的STAT3(pSTAT3)及Ki-67的表达,MTT法和流式细胞术检测Ad-ING4对SW1116大肠癌细胞生长抑制和诱导凋亡作用。体内实验分组同体外实验,采用SW1116大肠癌细胞株建立人大肠癌裸鼠移植瘤模型,使用瘤体局部多点注射用药,动态测量肿瘤体积,并计算抑瘤率,HE染色法观察瘤体细胞形态,免疫组化染色检测相关蛋白的表达:ING4、STAT3、pSTAT3及Ki-67。
　　结果:1,Ad-ING4可在QBI-293A细胞中增殖,病毒效价检测为(1-2)×109pfu/ml。2,Ad-ING4感染SW1116细胞后,RT-PCR和Western blot均检测到ING4表达。体外实验显示Ad-ING4能明显抑制人SW1116大肠癌细胞生长和诱导凋亡,Western blot显示Ad-ING4组、PTX组及联合组能引起SW1116细胞pSTAT3、Ki-67明显下调,与PBS组、Ad-GFP组相比具有显著差异(P<0.05),STAT3蛋白表达不变。3,体内实验显示Ad-ING4显著抑制大肠癌裸鼠移植瘤的生长,与PBS组、Ad-GFP组相比具有明显的抑制作用(P<0.05),且联合组对上述的作用较Ad-ING4组、PTX组更为显著。Western blot显示Ad-ING4组、PTX组及联合组能使肿瘤组织中pSTAT3、Ki-67明显下调,与PBS组、Ad-GFP组相比具有显著差异(P<0.05),STAT3蛋白表达不变。免疫组化染色显示Ad-ING4组、PTX组及联合组瘤体组织中pSTAT3、Ki-67阳性表达下降,STAT3蛋白阳性率不变。
　　结论:1,Ad-ING4体内外可抑制SW1116大肠癌细胞和大肠癌裸鼠移植瘤生长和诱导凋亡,具有抑瘤效应。2,Ad-ING4具有下调pSTAT3、Ki-67蛋白表达的效应,这可能是Ad-ING4具有抑癌效应的重要机制之一。3,Ad-ING4联合PTX对体内外SW1116大肠癌细胞和大肠癌裸鼠移植瘤的作用更为明显,具有化疗增敏效应。

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1引言

2材料与方法

2.1腺病毒和细胞及动物来源

2.2主要试剂

2.3仪器设备

2.4 体外实验方法

2.5体内实验方法

2.6 结果判断

2.7数据处理

3结果

3.1 体外实验结果

3.2 体内实验结果

4讨论

4.1 Ad-ING4基因对大肠癌细胞生物学行为的影响及意义

4.2 Ad-ING4基因对裸鼠SW1116大肠癌细胞移植瘤的抑瘤作用

4.3 ING4基因与STAT3磷酸化水平的关系

5结论

参考文献

附录

致谢

综述