卡维地洛对TLR4信号通路介导的H9C2心肌细胞凋亡的影响

摘要

目的:
　　探讨卡维地洛对TLR4信号通路介导的H9C2心肌细胞凋亡的影响,以及卡维地洛对TLR4、核转录因子κB(NF-κB)、β-抑制蛋白2(β-arrestin2)蛋白表达的影响,以探讨卡维地洛抗细胞凋亡的分子机制。
　　方法:
　　采用卡维地洛(1 um、5 um、10 umol/L)、NF-κB抑制剂PDTC(100 umol/L)、TLR4封闭抗体(20 ug/mL)预孵育H9C2心肌细胞1 h后,应用无血清1640作用24 h。实验分为7组:正常对照组(Control组),血清剥夺组(SD组),小剂量组卡维地洛组(Car1卡维地洛1 umol/L),中剂量组卡维地洛组(Car5卡维地洛5 umol/L),高剂量组卡维地洛组(Car10卡维地洛10 umol/L),TLR4封闭抗体组(TLR4-Ab组 TLR4封闭抗体20 ug/mL),NF-κB抑制剂PDTC组(PDTC组PDTC100 umol/L)。通过Annexin-V-FITC-PI双染方法检测细胞凋亡,应用蛋白质印迹技术检测TLR4、核蛋白NF-κB、β-arrestin2蛋白的表达。
　　结果:
　　(1)正常组发现少量凋亡 H9C2心肌细胞,血清剥夺组细胞凋亡明显升高(p<0.05);NF-κB阻断剂PDTC预处理能明显减少细胞凋亡(p<0.05);TLR4封闭抗体预处理能明显减少细胞凋亡(p<0.05);不同剂量卡维地洛预处理组能明显减少细胞凋亡(p<0.05)。
　　(2)与正常组比较,血清剥夺组 TLR4蛋白表达显著增加(p<0.05);NF-κB阻断剂 PDTC预处理和高剂量卡维地洛预处理能显著减低血清剥夺后TLR4蛋白的增加(p<0.05)。
　　(3)与正常组比较,血清剥夺组NF-κB蛋白表达显著增加(p<0.05);TLR4封闭抗体预处理和高剂量卡维地洛预处理能显著减低血清剥夺后 NF-κB蛋白的增加(p<0.05)。
　　(4)与正常组比较,血清剥夺组β-arrestin2蛋白表达减少(p<0.05);NF-κB阻断剂PDTC预处理、TLR4封闭抗体预处理和高剂量卡维地洛预处理组能增加β-arrestin2蛋白的表达(p<0.05)。
　　结论:
　　本实验证明TLR4信号通路与H9C2心肌细胞的凋亡有关。卡维地洛可以阻断NF-κB的活性,卡维地洛的具体作用可能是通过激活β-arrestin2阻断NF-κB,进而阻断TLR4的表达,卡维地洛也能直接阻断TLR4的表达。

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中文摘要

英文摘要

1.前言

2．材料与方法

2.1 实验材料

2.2实验方法

3.结果

3.1血清剥夺对H9C2心肌细胞凋亡的影响

3.2卡维地洛、TLR4封闭抗体、PDTC对血清剥夺H9C2心肌细胞凋亡的影响

3.3 卡维地洛、TLR4封闭抗体、PDTC对TLR4蛋白表达的影响

3.4 卡维地洛、TLR4封闭抗体、PDTC对NF-κB蛋白表达的影响

3.5卡维地洛、TLR4封闭抗体、PDTC对β-arrestin2蛋白表达的影响

4.讨论

5.结论

参考文献

致谢