MiR-192通过靶向ERCC3和ERCC4蛋白表达逆转胃癌细胞顺铂耐药性的研究

摘要

研究目的：胃的恶性肿瘤是临床诊断中一种常见的疾病，胃癌早期无明显症状，发现时往往为中晚期，而化疗是中晚期患者必不可少的。在胃癌化疗药物中，铂类是基础且重要的一种；然而，铂类原发或继发耐药是导致胃癌治疗失败的重要原因，探讨耐药机制、逆转铂类耐药是目前研究热点。研究表明：核苷酸切除修复（NER）是顺铂获得性耐药性的重要原因之一；而miRNA的表达异常（微RNA）可以通过多种细胞信号传导途径调节胃癌细胞的顺铂耐药性。近期有研究显示miR-192在 HepG2.2.15细胞中可以通过靶向抑制核苷酸切除修复途径中的ERCC3、ERCC4的表达增强对顺铂的敏感性。提示miRNA-192也许可以作为肝癌的治疗靶标；而miRNA-192在胃癌细胞中是否可以通过核苷酸切除修复途径调控顺铂耐药性还不清楚，值得探讨。
　　方法：采用彗星实验的方法检测人胃癌细胞SGC-7901与人胃癌细胞顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP的DNA损伤修复的能力，观察SCGE检测图像的尾长以评定 DNA的修复能力。采用real-time PCR检测 SGC-7901和SGC-7901/DDP miR-192的表达水平，利用脂质体Lipofectamine2000将成熟的miR-192的阻遏物 inhibitor、模拟物 mimic及阴性对照组 negative control RNA分别转染至SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞，用Western blot检测转染后的SGC-7901和SGC-7901/DDP中的ERCC3、ERCC4蛋白的表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡。采用细胞划痕检测SGC-7901/DDP和SGC-7901的迁移能力。
　　结果：人胃腺癌 SGC-7901/DDP较 SGC-7901的 SCGE图像的尾长短，SGC-7901/DDP的DNA损伤修复能力比SGC-7901强。miR-192在SGC-7901中表达较 SGC-7901/DDP增高；分别将 miR-192的 mimics和inhibitor转染入SGC-7901/DDP和SGC-7901中，与空白组和阴性对照组比较ERCC3和ERCC4的蛋白表达量分别降低和增高，而其细胞凋亡率则分别增高和降低。通过用细胞划痕的方法观测到SGC-7901/DDP较SGC-7901的迁移能力变差。
　　结论：miR-192通过上调NER途径中的ERCC3和ERCC4表达，增强胃癌细胞的DNA损伤修复能力，从而增加顺铂的耐药性。SGC-7901/DDP细胞的迁移能力较其亲本细胞减弱。

目录

封面

声明

目录

中英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

1前言

2实验材料

2.1 细胞来源

2.2 主要试剂和来源

2.3 主要溶液的配制

2.4主要仪器和设备

3 实验方法

3.1细胞培养

3.2 细胞形态

3.3彗星实验

3.4 实时定量 PCR（qRT-PCR）

3.5 细胞转染

3.6 Western blot

3.7 细胞凋亡的检测

3.8 细胞划痕实验

3.9 统计学分析

4 结果

4.1细胞形态

4.2人胃腺癌细胞株SGC-7901和SGC-7901/DDP的DNA损伤修复能力的差异

4.3 耐药细胞株与亲本细胞株miR-192的表达

4.4 耐药细胞株与亲本细胞株的ERCC3和ERCC4的表达

4.5miR-192 mimics或inhibitor转染后细胞的凋亡率的变化

4.6 细胞划痕实验

5 讨论

6 结论

参考文献

个人简历

致谢

综述: MiRNA调控核苷酸切除修复（NER）途径在肿瘤中的研究进展