α-硫辛酸对H9c2心肌细胞缺氧及缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制探讨

摘要

背景：
　　冠心病是严重威胁人类生命健康的疾病之一，随着生活水平的提高及人口老龄化的加重，其发病率呈逐渐增加趋势。冠心病的发病因素有很多种，其中最主要的是因为冠状动脉病变引起的狭窄或者阻塞，导致冠脉供血减少或中断，进一步使心肌发生缺血损伤，甚至坏死引起的心脏病。对于冠状动脉阻塞或狭窄引起的心肌供血功能障碍，目前考虑的手术治疗有很多种，其中常见的介入手术为―经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention，PCI）；常见的外科手术为―冠状动脉旁路移植术（coronaryartery bypass graft，CABG），但PCI及CABG治疗在恢复心肌血流的同时也会导致再灌注损伤，即所谓的心肌缺血-再灌注损伤(Ischemia-Reperfusion injury, IRI)[1]；而临床上对于一些冠状动脉病变程度未达到PCI治疗指征或冠脉血管病变严重而不能进行PCI及CABG治疗的冠心病患者，目前仍考虑药物治疗。因此，关于心肌缺血损伤，以及再灌注损伤的治疗，一直是临床关注的要点，如何减轻其损伤的发生发展，值得进一步探讨和研究。
　　目的：
　　建立H9c2心肌细胞缺氧及缺氧/复氧损伤模型，并探讨α-硫辛酸（α-LA）对H9c2心肌细胞缺氧及缺氧/复氧损伤的保护作用及其作用机制。
　　方法：
　　1.研究包括H9c2心肌细胞缺氧实验和缺氧/复氧实验两部分。利用H9c2心肌细胞建立的缺氧及缺氧/复氧损伤模型，将培养的心肌细胞分成常氧组、缺氧组或缺氧/复氧组、硫辛酸组（ LA组）、乙醛脱氢酶抑制剂异黄酮苷（Daidzin）组（Daidzin组）、二甲亚砜（DMSO）溶剂对照组（DMSO组）。
　　2.分别采用噻唑蓝（MTT）比色法检测心肌细胞存活率；微量酶标法测定乳酸脱氢酶（LDH）活性；酶联免疫吸附实验（ELISA法）检测心肌细胞乙醛脱氢酶2（ALDH2）活性；硫代苯巴比妥（TBA）比色法检测丙二醛（MDA）水平。
　　结果
　　1.与常氧组相比，缺氧组和缺氧/复氧组细胞存活率均下降(P<0.01)，LDH活性及MDA含量均升高(P<0.01)；
　　2.与缺氧组或缺氧/复氧组相比，LA组细胞存活率上升(P<0.01)、ALDH2活性增加(P<0.05)、LDH活性及MDA含量降低(P<0.01)；
　　3.LA组、Daidzin组、DMSO组三组相比，LA组与 DMSO组间细胞存活率、ALDH2活性、LDH活性、MDA含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)；Daidzin组与LA组、DMSO组相比，细胞存活率及ALDH2活性降低(P<0.05)，LDH活性及MDA含量升高(P<0.05)，差异均有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　α-LA能通过增加ALDH2活性，并降低过氧化终产物产生，最终减轻心肌细胞缺氧以及缺氧/复氧过程中的氧化损伤。

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1. 前言

2. 材料和方法

2.1 H9c2 心肌细胞的培养及缺氧及缺氧/复氧损伤模型的建立

2.2 实验分组设计及各组各项指标的检测

2.3 统计学处理

3. 结果

3.1 α-LA对缺氧实验组及缺氧/复氧实验组心肌细胞存活率的影响

3.2 α-LA 对缺氧实验组及缺氧/复氧实验组心肌细胞 LDH 的影响

3.3 α-LA 对缺氧实验组及缺氧/复氧实验组心肌细胞 MDA 的影响

3.4 α-LA 对缺氧实验组及缺氧/复氧实验组心肌细胞 ALDH2 的影响

4. 讨论

4.1 H9c2 心肌细胞缺氧及缺氧/复氧模型的成功建立

4.2 ALDH2 对心肌缺血缺氧的影响

4.3 α-LA 对 H9c2 心肌细胞的影响

4.4 总结

4.5 本研究的不足及展望

5. 结论

参考文献

附录

致谢

综述: ALDH2与心肌缺血及再灌注损伤的研究概况