孕期补充维生素D预防LPS诱发的小鼠流产

摘要

目的：探讨通过孕期补充维生素D对LPS诱发小鼠流产的影响。
　　方法：健康清洁级 ICR小鼠（8-10周龄，其中雄鼠：28~30 g，雌鼠：24~26 g），饲养环境保持12小时昼夜节律，温度维持在20~25℃，湿度维持在50±5%之间。小鼠在此环境下自由饮水饮食，合笼前进行适应性喂养1周。晚21:00按雌雄比例2:1进行合笼，次日早7:00进行雌鼠阴栓检查。查到阴栓的雌鼠视为交配成功即孕鼠，记为孕期第0天即GD0。孕鼠在孕期第0天(GD0)随机分为4组：对照组，VitD3组，LPS组和VitD3+LPS组。VitD3组和VitD3+LPS组孕鼠于GD5至GD7每天经灌胃给予25μg/kg的维生素D3乳化剂；对照组和LPS组于GD5-7给予等容量单纯乳化剂；LPS组和VitD3+LPS组于GD7经腹腔注射给予150μg/kg的LPS；对照组和VitD3组与GD7经腹腔注射给予等容量的生理盐水。GD8剖杀各组孕鼠，记录每窝孕鼠子宫内胚胎着床总数以及胚胎存活个数。发生一个或一个以上胚胎丢失的即胚胎存活数小于胚胎着床数的记为流产孕鼠；无胚胎着床数或胚胎组织碎片的为未怀孕鼠，需将其从实验中剔除。最后分别计算四个组孕鼠流产率，并进行比较。为研究VitD3对LPS引起母体内炎症反应的影响，将孕鼠随机分为六组（对照组，VitD3组，LPS2h组和VitD3+LPS2h组，LPS6h组和VitD3+LPS6h组）。GD7经腹腔注射给予150μg/kgLPS和等容量生理盐水2 h和6 h后分别剖杀各组孕鼠，收集母鼠血清与子宫连胎。用ELISA法检测孕鼠母体血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2、NO和PGF2α的蛋白水平，用免疫组织化学分析方法检测子宫蜕膜细胞中COX-2、NF-κB p65和VDR的蛋白表达。
　　结果：在LPS组中经LPS处理后引起62.5%（10/16）的孕鼠发生流产；在VitD3+LPS组中进行了维生素D3预处理后，流产率降低至14.3%（2/14）。通过小鼠流产模型实验中可得出，孕早期补充维生素D3可一定程度降低LPS诱发的小鼠流产发生率。通过ELISA法检测孕鼠血清中炎性因子TNF-α, IFN-γ,趋化因子MIP-2和NO的蛋白水平。LPS组母鼠血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2和NO的蛋白水平显著高于对照组；VitD3+LPS组母鼠血清中TNF-α、IFN-γ、MIP-2和NO的蛋白水平显著低于LPS组。该实验结果表明通过孕早期补充VitD3可减轻LPS诱导的母体内相关炎症反应。通过免疫组织化学分析法发现，LPS组母鼠子宫蜕膜细胞中COX-2的表达显著高于对照组；VitD3+LPS组中母鼠子宫蜕膜细胞中COX-2的表达显著低于LPS组。通过ELISA法检测孕鼠血清中PGF2α的蛋白水平，LPS组母体血清中PGF2α的含量显著高于对照组；VitD3+LPS组中母体血清中PGF2α的含量显著低于LPS组。以上实验结果表明，孕早期补充维生素D3可以减少LPS诱导母鼠子宫蜕膜细胞中COX-2的表达并且有效降低母鼠血清中PGF2α的含量。通过ELISA法检测母体血清中IL-10蛋白含量，实验结果显示单纯维生素D3处理组中母体血清中IL-10蛋白含量与对照组相比无显著差异；LPS处理组中母鼠血清中IL-10的含量显著高于对照组；VitD3+LPS组中IL-10含量显著高于LPS处理组。该结果表明，维生素D可进一步促进LPS组中孕鼠母体血清中抗炎因子IL-10的升高。通过免疫组织化学法分析，VitD3组中母鼠子宫蜕膜细胞中VDR的核表达显著高于LPS组和对照组；LPS组中母鼠子宫蜕膜细胞中NF-κB p65的核表达显著高于对照组，VitD3+LPS组中母鼠子宫蜕膜细胞中NF-κB p65的核转运与LPS组相比有所降低。该结果表明，小鼠灌胃给予维生素D3可以激活子宫蜕膜中VDR的核表达并通过抑制LPS诱导的NF-κB p65在子宫蜕膜细胞中的核转运来减轻母体内炎症反应，从而降低流产发生率。
　　结论：孕期补充维生素D3可通过抑制LPS诱发的相关炎症反应来降低小鼠流产的发生率。

目录

声明

英文缩略词

1 前言

2 材料和方法

2.1 主要试剂及来源

2.2 维生素D3配置

2.3 动物来源及处理

2.4 实验方案

2.5 小鼠妊娠结局的评价

2.6 酶联免疫吸附试验（ELISA）

2.7 血清中NO检测

2.8 免疫组织化学分析（IHC）

2.9统计分析

3 结果

3.1 孕期补充维生素D3可以减少LPS诱发的小鼠流产

3.2 孕期补充维生素D3可以抑制LPS诱导的炎性因子和趋化因子

3.3 孕期补充维生素D3可以升高母体血清中IL-10的水平

3.4 孕期补充维生素D3可以抑制LPS诱导母体血清中NO的产生

3.5 孕期补充维生素D3可以抑制LPS诱导的COX-2和PGF2α

3.6 孕期补充维生素D3可抑制LPS诱导子宫蜕膜细胞中NF-κB p65的核转运

3.7 孕期补充维生素D3促进子宫蜕膜细胞中VDR的核转运

4 讨论

5结论

参考文献

附录

致谢

综述:维生素D缺乏对妊娠及其结局的影响