引言
材料与方法
1.1仪器、试剂和耗材
1.1.1 主要仪器
1.1.2 主要试剂和耗材
1.1.3常用试剂配制
1.2 细胞系及胃癌组织标本的选择
1.2.1细胞系的选择
1.2.2 胃癌组织标本的选择
1.3 细胞处理
1.3.1 实验前准备
1.3.2细胞复苏
1.3.3培养液的更换
1.3.4细胞传代
1.4 CXCR4及相关基因mRNA检测
1.4.2 cDNA合成
1.4.3 实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)
1.4.4 microRNA逆转录
1.4.5 microRNA表达水平检测
1.4.6 Real-time qPCR 结果数据分析
1.5 CXCR4及相关蛋白检测
1.5.1 细胞系总蛋白的提取
1.5.2 蛋白浓度的测量
1.5.3 Western blott 检测细胞系中蛋白的表达
1.5.4 PI3K通路抑制剂LY294002作用后检测蛋白表达变化
1.5.5 免疫组织化学染色(SP法)检测胃癌组织中CXCR4蛋白的表达
1.5.6 免疫荧光检测胃癌细胞中蛋白亚定位
1.6 CXCR4甲基化状态检测
1.6.2 DNA 样本的焦亚硫酸盐修饰
1.6.3 亚硫酸盐基因组测序
1.7 细胞转染
1.7.2 siRNA转染
1.8 细胞生物学表型实验的检测
1.8.1 细胞凋亡实验
1.8.2细胞周期实验检测
1.9 细胞自噬的检测
1.9.2 共聚焦显微镜检测自噬体的形成
2.0统计学和图像分析
结果
2.1 GSE51575数据集中CXCR4的转录表达
2.2 胃癌细胞系中CXCR4及相关基因的转录表达
2.3胃癌细胞系及组织中CXCR4蛋白表达
2.4 CXCR4启动子和第1外显子甲基化状态检测结果
2.5 LMP1对CXCR4表达的调控作用
2.6 EBV相关胃癌细胞中microRNA-146a的转录表达
2.7 microRNA-146a潜在靶基因的预测
2.8 microRNA-146a对CXCR4表达的调控作用
2.9 AGS和AGS-EBV细胞系中PI3K/AKT表达
2.10 LY294002通路抑制剂作用后CXCR4蛋白表达变化
2.11 LMP2A对CXCR4表达的调控作用
2.12 CXCR4蛋白对细胞自噬的调控作用
2.13 CXCR4对细胞凋亡和周期的影响
2.14 CXCR4和自噬在EBV潜伏期的作用
讨论
结论
参考文献
综述: CXCR4与肿瘤及病毒感染关系的研究进展
参考文献
攻读学位期间的研究成果
附录或缩略词表
致谢
声明
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