引言
第一部分 NF-κB经典信号通路在EBV相关胃癌中持续激活的机制研究
1. 仪器、试剂和耗材
2. 胃癌细胞系及组织标本的选择
3. 细胞处理
4. NFKBIA基因启动子区甲基化状态检测
5. NFKBIA及相关基因 mRNA 检测
6. IκBα及相关蛋白检测
7. 细胞增殖能力检测(CCK-8试剂盒)
8. 流式细胞术检测细胞凋亡
9. LMP1和LMP2A过表达细胞系的建立
10. siRNA及miRNA转染
11. 双荧光素酶报告基因检测
12. 细胞核蛋白与浆蛋白提取
13.NF-κB p65转录因子试剂盒p65-DNA结合能力检测
14. EBV-DNA拷贝数相对及绝对定量
15. 统计学和图像分析
结果
1. qRT-PCR 检测NF-κB经典信号通路相关基因的转录表达
2.胃癌细胞系中NFKBIA(IκBα)及相关基因的蛋白表达
3 胃癌细胞系TRAF1/2/3/6蛋白表达
4. NFKBIA甲基化状态检测结果
5. p65蛋白在胃癌细胞系中的亚细胞定位
6. ELISA检测胃癌细胞系NF-κB转录因子活性
7. 胃癌组织中IκBα及相关基因的表达
8. NF-κB经典信号通路对EBV阳性胃癌细胞增殖、凋亡的影响
9. 抑制NF-κB信号通路对ZEB1表达的影响
10. 抑制NF-κB信号通路对EBV潜伏膜蛋白LMP1和LMP2A的影响
11. 胃癌细胞系NFKBIA 基因变异检测
12. EBV编码的miRNA-BART16对IκBα表达的影响
13 LMP1对NF-κB信号通路的调控作用
14. LMP2A对NF-κB信号通路的调控作用
15. 稳定转染LMP1及LMP2A对NF-κB信号通路的调控作用
16. 干扰TRAF1对NF-κB信号通路的影响
讨论
一、EBVaGC 中NF-κB 经典信号通路的持续激活
二、EBV 对宿主基因的甲基化调控
三、基因突变对NF-κB 信号通路激活的作用
三、miRNA 对NF-κB 信号通路的调控作用
四、EBV 编码产物调控NF-κB 信号通路的激活
结论
参考文献
第二部分EBV编码miR-BART16通过靶定LMP1调节肿瘤细胞增殖
引言
材料与方法
1. 仪器、试剂和耗材
2. 细胞培养(同第一部分)
3. RNA的提取(同第一部分)
4. miRNA的逆转录及实时荧光定量检测
5. 细胞增殖能力检测(同第一部分)
6. 细胞周期检测
7. 统计学分析
结果
1 EBVaGC细胞系及胃癌组织中miR-BART16与LMP1的相对表达量
2. miR-BART16调控LMP1的表达
3. miR-BART16对细胞增殖的影响
4. miRNA-BART16对细胞凋亡的影响
5. miR-BART16对细胞周期的影响
讨论
结论
参考文献
综述:EBV编码潜伏基因产物结构功能与信号转导通路研究
综述参考文献
攻读学位期间的学术成果
缩略词表
致谢
声明
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