溶血磷脂酸及其受体在鼠肺纤维化模型中的表达及意义

摘要

目的：本研究旨在鼠肺纤维化模型中，检测肺纤维化不同时期溶血磷脂酸及其三种受体亚型LPA1、LPA2及LPA3的表达情况，分析溶血磷脂酸及其受体与肺纤维化的关系，进而探讨肺纤维化的发病机制。　　方法：选取8周龄昆明小鼠80只，（北京维通利华实验动物技术有限公司）40-60g之间，雄性，按照随机数字表法分为生理盐水对照组和博来霉素组（实验组），每组各40只。称重后，实验组给予博来霉素（3.5mg/kg）一次性经气管注入，于实验0d气管内一次性注入生理盐水2ml/kg。造模完成后常规饲养。以上2组小鼠分别在14天、21天、28天时各处死10只，取血、提取肺组织，常规福尔马林固定，包埋，切片，行苏木精-依红（HE）染色、Masson胶原染色法评价肺泡炎及肺纤维化情况。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中LPA在14、21、28天时在对照组及实验组的表达情况；用免疫组化法检测14、21、28天时小鼠肺组织中溶血磷脂酸三种受体亚型(LPA1、LPA2、LPA3)在对照组及实验组的表达情况。　　结果：（1）小鼠一般情况：博来霉素组小鼠在造模后逐渐出现精神萎靡，进食少，消瘦，毛色灰暗，唇及爪紫绀。对照组整体状态均较博来霉素组好，未发生显著变化；肺脏外观：对照组动物双肺淡粉色，肺叶清晰，表面光滑，湿润，弹性好。博来霉素组双肺逐渐出现颜色暗红甚至苍白，弹性逐渐变差，体积由大变小，质变硬，部分出现少数出血点；（2）与对照组相比，实验组在14天、21天及28天均呈明显肺泡炎性病理改变，且具有统计学意义（P＜0.01），于第14天肺泡炎最为明显，第21、28天肺泡炎改变逐渐减弱；与对照组相比，实验组第14天、21天和28天均可见肺纤维化病理改变，并随时间延长逐渐加重，且具有统计学差异（P＜0.01）；（3）NS组小鼠血清中LPA有少量表达，BLM组小鼠血清中LPA呈高表达，各观察时间点血清的LPA表达水平较正常对照组明显增加，有显著性差异（P＜0.01）（4）相较对照组，实验组肺组织中LPA三个受体亚型LPA1、LPA2、LPA3在气道上皮细胞膜呈高表达，并随时间延长而加重，在28天时最高，并有统计学意义（p<0.05）。实验组组内对比，每一周三种LPA受体亚型均较上一周期表达增多，并具有统计学差异（p<0.05）。（5）小鼠生存情况：对照组小鼠分别于实验第2、7、10天各死亡1只；BLM组小鼠分别于实验第1、5、12、17、25天各死亡1、2、2、3、1只。　　结论：(1)肺纤维化小鼠模型其肺部病理改变早期以肺泡炎症改变为主,晚期则以肺间质纤维化为主；（2）溶血磷脂酸及其三个受体亚型LPA1/2/3在正常对照组有少量表达，在肺纤维化过程中呈高表达，表明溶血磷脂酸及其三种受体亚型LPA1、LPA2、LPA3介导的通路参与肺纤维化的发生过程。

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引言

实验材料及方法：

1．材料

1.1动物及分组

1.2主要试剂

1.3主要仪器

2．实验方法：

2．1博来霉素构建小鼠肺纤维化模型：

2．2指标观测

2.3 HE染色及Masson染色

2. 4 ELISA法检测血清中LPA的表达

2．5 免疫组化法检测LAP1/2/3三种受体亚型：

结果：

结果

讨论：

结论：

参考文献

缩略语表

攻读学位期间发表文章及科研情况

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