碘乙酰胺（IA）诱导小鼠成纤维细胞水通道蛋白1（AQP1）的表达

摘要

AQPs是最近发现的水通道家族。其中水通道蛋白AQP1是一种最先从红细胞分离出来的28kDa蛋白，它在肾脏、肺、脑和眼均有表达，其调节机制是复杂的。体外培养小鼠成纤维细胞自然表达AQP1，故本文以小鼠成纤维细胞为研究对象，通过碘乙酰胺模拟低氧，探讨其在等渗和高渗不同状态下AQP1表达的变化。 方法： 1．细胞培养和收集。 小鼠成纤维细胞用含有10％FBS的培养液，放于37℃，5％CO<,2>的孵箱中培养。另向培养液中加入山梨醇配成0.1M和0.4M的高渗培养液。实验时，细胞分别用等渗和高渗培养液孵育，并向其中加入碘乙酰胺(30umol/L)，分别于0h，4h及6h收集细胞并冻结。用冰一细胞裂解液重悬浮细胞沉淀，形成一个冻融循环。细胞上清以BSA为标准，用BCA试剂盒测定蛋白浓度。 2．SDS/PAGE and Western blotting。 细胞溶解产物进行SDS/PAGE凝胶电泳，并且将免疫印记蛋白转印到膜上。用化学发光和放射自显影术增强免疫印记使之可见。用凝胶图象分析系统测定相对密度。 3．统计学分析。 测定每组通过放射自显影术得到的蛋白免疫印记结果的密度，用均值±标准差表示。对不同干涉用非配对t-检验进行统计学分析。 结果： 1．细胞形态学变化正常时，细胞主要呈梭形，多角状，分裂相细胞呈类圆形，单层贴壁生长。在给予IA 4小时细胞形态变圆，体积变大；6小时细胞核增大，细胞溶解坏死。 2．Western-blot免疫印记检测结果通过免疫印记定量测定，细胞等渗培养滴加IA(30umol/L)4小时，AOP1表达增加24.4％(n=6，P>0.05)。6小时AOP1表达增加193.8％(n=6，P<0.05)。 细胞0.1M高渗培养滴加IA(30umol/L)4小时AQP1表达增加84.7％(n=2，P>0.05)，6小时AQP1表达增加63.8％(n=2，P>0.05)。 细胞0.4M高渗培养后AQP1处于高表达，滴加IA 4小时AQP1表达略有降低，为8.9％，6小时AQP1表达增加26.2％。 比较高渗培养和等渗培养，高渗培养滴加IA后AQP1表达峰值前提。 讨论： 研究表明，在有水通道蛋白表达的上皮细胞和内皮细胞，其水渗透性也高；在接近出生时肺水通道蛋白的表达是增加的；AQP1敲除小鼠肺泡一毛细血管间水的渗透性水通透性较野生型降低；肾脏、体外培养的小鼠成纤维细胞和在体小鼠高渗均诱导AQP1的表达。 研究显示由碘乙酰胺模拟缺氧，在等渗和高渗状态下均可诱导小鼠成纤维细胞APQ1的大量表达。可以推测缺氧条件下AQP1参与细胞水的转运。 结论： 碘乙酰胺(IA)可诱导小鼠成纤维细胞水通道蛋白1(AQP1)的大量表达，提示缺氧条件下AQPl参与细胞水的转运。

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实验结果

讨论

结论

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参考文献

综述碘乙酰胺（lA）的作用机制及其与水通道的关系

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