串联超滤--TiO2富集--液相色谱--质谱法快速提取及鉴定尿液中尿蛋白及外泌体的研究

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摘要

1．1．1蛋白质组学

1．1．2尿液与其他生物体液相比的优势

1．1．3尿蛋白

1．2外泌体

1．2．1外泌体的起源、结构及其生物学特性

1．2．2尿液中的外泌体

1．2．3外泌体的提取

1．3磷酸化蛋白质组的研究

1．3．1磷酸化蛋白质组的研究现状

1．3．2磷酸化蛋白质和磷酸化肽的富集技术

1．4本文选题意义及研究内容

第2章串联超滤法提取尿液中的外泌体和尿蛋白

2．1引言

2．2实验部分

2．2．1仪器与试剂

2．2．2溶液配制

2．2．3实验操作

2．3结果与讨论

2．3．1超滤管截留分子量的优化选择

2．3．2外泌体的“蛋白质免疫印迹”检测

2．3．3外泌体的表征

2．3．4基于蛋白质表达谱对外泌体的分析

2．3．5串联超滤法与丙酮沉淀法对尿蛋白的回收率对比

2．3．6串联超滤法的重现性分析

2．4本章小结

第3章尿液中外泌体和尿蛋白的磷酸化肽段富集及液相色谱-质谱鉴定

3．1引言

3．2实验部分

3．2．1仪器与试剂

3．2．2溶液配制

3．2．3二氧化钛富集尿液外泌体及尿蛋白中磷酸化肽段

3．2．4液质联用分析条件及数据检索

3．3实验结果与讨论

3．3．1二氧化钛富集磷酸化肽段的效率

3．3．2外泌体和尿蛋白磷酸化修饰蛋白的质谱鉴定及数据分析

3．4本章小结

第4章结论

参考文献

致谢