硫化氢缓释供体ADT后处理对大鼠在体心肌缺血再灌注损伤的保护——AMPK介导的自噬流在其中的作用

摘要

目的：　　观察硫化氢缓释供体ADT后处理是否对大鼠在体心肌缺血再灌注（I/R）损伤具有保护作用，探讨腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）介导的自噬流在其中的作用，研究硫化氢后处理心肌保护的机制。　　方法：　　成年雄性SD大鼠202只，建立急性大鼠在体心肌I/R损伤模型。随机分为9组：假手术组（Sham组）、单纯缺血再灌注对照组（I/R+vehicle组）、缓释硫化氢供体ADT后处理组（I/R+ADT组）、单纯ADT对照组（Sham+ADT组）、AMPK抑制剂Compound c组（I/R+ADT+CC组）、Compound c溶剂二甲基亚砜对照组（I/R+ADT+DMSO组）、氯喹溶剂生理盐水对照组（I/R+ADT+NS组），自噬流抑制剂氯喹组（I/R+ADT+CQ），单纯氯喹对照组（I/R+CQ组）。除Sham和Sham+ADT组外，其余各组均缺血30 min，再灌注4 h。Sham，I/R+vehicle和I/R+CQ组于缺血末再灌注开始即刻腹腔注射ADT溶剂（10％DMSO+玉米油），其余各组均注射ADT（50 mg/kg）；I/R+ADT+CC和I/R+ADT+DMSO组于再灌注开始即刻分别静脉给予Compound c（250μg/kg）和等体积DMSO；I/R+ADT+CQ和I/R+CQ组于手术开始前1 h腹腔注射氯喹（10 mg/kg），I/R+ADT+NS组注射等体积生理盐水。再灌注4 h末，提取心脏，采用氯化三苯基四氮唑染色法（TTC法）测定心肌梗死范围并通过苏木精-伊红染色法观察心肌细胞形态学变化；采用原位二氢乙啶（DHE）染色法检测活性氧（ROS）的生成。采用免疫印迹法（Western blot技术）检测p-AMPK/t-AMPK、p-S6/t-S6、Beclin-1、LAMP-2、LC3Ⅱ/Ⅰ及P62蛋白表达水平。　　结果：　　与Sham组和Sham+ ADT组比较，各组心肌梗死范围增大，心肌细胞损伤增加，ROS生成增多，Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ和P62蛋白表达上调，LAMP-2蛋白表达下调（P<0.05）。　　与I/R+vehicle组比较，I/R+ADT组心肌梗死范围减小，心肌细胞损伤和ROS生成减少，p-AMPK/AMPK及LAMP-2蛋白表达上调，p-S6/S6、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ及P62蛋白表达下调（P<0.05）。　　与I/R+ADT组比较，I/R+ADT+CC组心肌梗死范围增加，细胞损伤和ROS生成增加，p-AMPK/AMPK及LAMP-2蛋白表达下调，p-S6/S6、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ及P62蛋白表达上调（P<0.05）。　　与I/R+ADT组比较，I/R+ADT+CQ组心肌梗死范围增加，LAMP-2蛋白表达下调，LC3Ⅱ/Ⅰ和P62蛋白表达上调（P<0.05）。　　结论：　　硫化氢缓释供体ADT对大鼠在体心肌I/R损伤具有保护作用，可能是通过激活AMPK，减少再灌注期间自噬体清除的破坏，保护了自噬流，进而抑制再灌注期间细胞内ROS的生成和细胞死亡。

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序言

第一部分 AMPK在ADT后处理保护大鼠在体心肌I/R损伤中的作用

引言

材料与方法

结果

小结

附图及附表

第二部分 AMPK介导的自噬流在ADT后处理保护大鼠在体心肌I/R损伤中的作用

引言

材料与方法

结果

小结

附表及附图

讨论

1 动物模型建立的评价

2 硫化氢心肌保护作用的评价

3 AMPK信号转导通路

4 自噬

5 不足之处与创新点

结论

参考文献

综述:硫化氢对心肌缺血再灌注损伤的保护机制

中英文对照缩略词表

攻读硕士学位期间公开发表的论文及科研成果

致谢