黄连木初代培养及褐变影响因子的研究

摘要

随着能源消耗量的不断增加，常规能源的不可再生性和环境恶化效应，迫使人类不得不重新审视和调整能源发展战略，于是可再生的生物能源成为人类21世纪能源研究发展的热点。黄连木（Pistacia chinensis Bunge）属漆树科黄连木属落叶乔木，原产我国，是我国珍贵木本用材树种和生物能源树种。
　　 本实验以黄连木茎段为外植体，研究外植体最佳灭菌方法、腋芽诱导最佳培养基配方及褐变影响因子。在黄连木组培快繁初代过程中，外植体易发生褐变，导致外植体生理功能衰退，严重阻碍黄连木组培快繁的正常进行。本文对黄连木外植体褐变相关的影响因子进行了比较系统研究，目的在于从理论上认识外植体褐变，通过各因素对褐变的影响，找到影响褐变的主导因子，以期为抑制黄连木外植体褐变提供技术支持。
　　 研究结果表明：
　　 1．黄连木外植体最佳灭菌方法是：黄连木茎段→洗衣粉上清液浸泡10min并用软刷刷去表面污垢→自来水冲洗30min→超净台上用70％酒精浸20S→无菌水冲洗2次→0.1％升汞浸8min→无菌水冲洗8次→接种到培养基上。
　　 2．影响黄连木腋芽萌发的主要因素有：基本培养基、6-BA、NAA。黄连木腋芽诱导最佳培养基是：1/2DKW+BA1.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+IBA0.3mg·L-1+食糖30g+琼脂8g，PH值5.8。
　　 3．黄连木外植体的取材季节和部位是影响褐变的主要因子，5月中旬是取材的最佳时期。琼脂浓度对黄连木外植体褐变有显著影响，添加8g·L-1琼脂的培养基防止褐变的效果最佳。低温处理对减缓褐变有一定的影响，但会影响外植体生活能力。水解乳蛋白防止外植体褐变的最佳浓度为300mg·L-1。缩短转接周期可以减轻褐变的发生，转接周期越长褐变程度越严重。不同种类抑制剂对褐变有着不同的影响，活性炭抑制褐变效果明显，常规褐变抑制剂硫代硫酸钠、VC、PVP对黄连木外植体褐变效果影响不显著。

目录

文摘

英文文摘

声明

1文献综述

1.1植物组织培养外植体褐变的研究进展

1.2影响组培外植体褐变的因子

1.2.1外植体的生理状态

1.2.2培养基

1.2.3培养条件

1.3克服外植体褐变的措施

1.3.1外植体的选择及预处理

1.3.2添加抑制剂和吸附剂

1.3.3其他方法

1.4褐变的机理

1.4.1自由基伤害假说

1.4.2酚-酶区域性分布假说

1.4.3保护酶系统假说

1.5黄连木概况

1.5.1黄连木的形态特征及生物学特性

1.5.2黄连木的经济价值

1.5.3黄连木的观赏价值及在园林中应用

1.5.4黄连木繁殖方式及研究现状

2引言

3试验材料和研究方法

3.1初代培养设计

3.1.1供试材料

3.1.2外植体最佳灭菌措施的筛选

3.1.3腋芽诱导最佳培养基的筛选

3.2黄连木外植体褐变影响因素的研究

3.2.1外植体生理状态

3.2.2不同预处理试验

3.2.3取材时间对外植体污染与褐变的影响试验

3.2.4培养基浓度对褐变的影响试验

3.2.5褐变抑制剂种类及浓度对褐变的影响试验

3.2.6糖类物质对褐变的影响

3.2.7水解乳蛋白对褐变的影响

3.2.8转接周期对褐变的影响

3.2.9培养温度对褐变的影响

3.3数据统计方法与分析工具

4结果与分析

4.1初代培养

4.1.1灭菌措施对外植体灭菌效果的影响

4.1.2基本培养基及植物生长调节剂对腋芽诱导的影响

4.2黄连木外植体褐变影响因素的研究

4.2.1不同来源外植体对褐变的影响

4.2.2外植体取材部位对褐变的影响

4.2.3不同预处理措施对褐变的影响

4.2.4外植体采集时期对褐变的影响

4.2.5琼脂浓度对褐变的影响

4.2.6褐变抑制剂种类及浓度对褐变的影响

4.2.7糖类物质对褐变的影响

4.2.8水解乳蛋白对褐变的影响

4.2.9转接周期对褐变的影响

4.2.10培养温度对褐变的影响

5结论与讨论

5.1结论

5.1.1黄连木组织培养条件：

5.1.2外植体的选取

5.1.3外植体无菌体系的建立

5.1.4腋芽诱导的最佳培养基

5.1.5外植体褐变影响因子的研究

5.2讨论

5.1.1外植体的选择和灭菌

5.2.2关于无菌繁殖系的建立

5.2.3褐变影响因素

5.2.4其他

参考文献

致谢

个人简介及在读期间发表的论文

附图