脂联素对皖南花猪下丘脑生殖内分泌的影响

摘要

皖南花猪是安徽省黄山市的地方优良猪种之一,具有繁殖率高、产仔多、肉质好等优良特性。脂联素是主要由脂肪组织细胞分泌的一种生物活性物质,与动物的生殖性能有着十分密切的关系。本试验通过测定分析皖南花猪血清中脂联素(Adiponectin,Adp),GnRH和GnIH含量;下丘脑组织中脂联素、脂联素受体(Adiponectin receptor,AdpR)、GnRH和GnIH基因表达量的发育性变化规律及相关性,进而探讨Adp与皖南花猪生殖作用的联系。通过重组脂联素(recombinant adiponectin,rAdp)对小鼠下丘脑GnRH细胞和GnIH细胞的GnRH和GnIH基因表达的影响,探索Adp对下丘脑生殖激素合成的影响。
　　1、体内试验:脂联素与GnRH和GnIH在皖南花猪下丘脑组织中的发育性变化及其相关性研究
　　随机选取0d、30d、45d、90d、180d的皖南花猪各10头(公、母各5头)进行试验。ELISA法测定血清中Adp、GnRH和GnIH激素的水平;用FQ-PCR法检测下丘脑组织中Adp、AdpR1、AdpR2、GnRH和GnIH mRNA的表达。结果显示:
　　(1)皖南花猪血清脂联素与GnRH和GnIH水平均有极显著的发育性变化,在30d时脂联素极显著低于其他日龄,而GnRH和GnIH显著或极显著高于其他日龄(P<0.05或P<0.01)。
　　(2)皖南花猪下丘脑组织脂联素mRNA表达量很低,AdpR1、AdpR2 mRNA在不同发育阶段的表达量相对稳定(P>0.05),AdpR1 mRNA表达量在各个日龄均显著高于AdpR2(P<0.05)。皖南花猪下丘脑组织GnRH、GnIH mRNA发育性变化总体呈下降趋势,GnRH、GnIH mRNA在下丘脑中的发育性变化总体呈下降趋势,GnRH和GnIH mRNA表达量分别在45d和90d最低。刚出生的母猪下丘脑GnRH mRNA表达量显著高于其他日龄(P<0.05)。
　　(3)性别间比较发现,公猪AdpR1 mRNA在0d,AdpR2和GnRH mRNA在30d显著高于母猪(P<0.05)。
　　(4)相关性分析结果:皖南花猪下丘脑组织中AdpR1与GnRH表达量显著负相关(P<0.05);血清中Adp与GnRH水平显著负相关(P<0.05),母猪Adp与GnRH显著负相关(P<0.05)。GnRH与GnIH含量在公、母猪和总体上均极显著正相关(P<0.01)。
　　以上结果提示:在皖南花猪发育过程中脂联素可能通过内分泌并由AdpR1介导从而抑制GnRH的分泌,而这种抑制主要表现在母猪中。
　　2、体外试验:脂联素对小鼠下丘脑细胞生殖激素基因表达的影响
　　选取怀孕18d的小鼠在无菌条件下取胎鼠下丘脑组织分离培养下丘脑细胞。培养5d后用重组脂联素处理,试验设置4h和24h两个时间点,每个时间点设置2μg/ml和10μg/ml两个浓度。FQ-PCR方法检测下丘脑细胞中AdpR1、AdpR2、GnRH和GnIH mRNA表达量。结果显示:
　　(1)重组脂联素对脂联素受体基因表达的影响:2μg/ml的重组脂联素处理4h后AdpR2 mRNA表达量极显著下降(P<0.01),其余均无显著变化。此外,下丘脑细胞中AdpR1 mRNA表达量显著高于AdpR2的mRNA表达量(P<0.01);
　　(2)重组脂联素对下丘脑GnRH细胞和GnIH细胞中GnRH和GnIH基因表达的影响:下丘脑细胞加入重组脂联素24h后,10μg/ml组的GnRH和GnIH mRNA的表达量受到极显著的抑制(P<0.01)。加入4h后,两个浓度组对GnRH和GnIH mRNA表达量均无显著的影响(P>0.05)。
　　以上结果提示:脂联素可能由AdpR1介导抑制GnRH和GnIH基因的表达,且脂联素对GnRH和GnIH的调节有一定的剂量效应和时间效应。

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图表目录

论文中出现的英文缩写集

文 献 综 述

引 言

1 材料与方法

1.1试验动物饲养与处理

1.2样品采集

1.3主要试验试剂及仪器

1.4下丘脑细胞的培养

1.5细胞实验设计

1.6细胞的鉴定

1.7血清中相关生殖激素含量测定（ELISA法）

1.8实时荧光定量RT-PCR测定各个基因的表达水平

1.9数据分析

2 结 果

2.1皖南花猪猪血清中的Adp、GnRH、GnIH的发育性变化及相关性

2.2试验的样品RNA质量检测结果

2.3 cDNA纯度的鉴定

2.4培养的鼠下丘脑GnRH、GnIH细胞的鉴定

2.5荧光实时定量RT-PCR标准曲线的建立和扩增曲线

2.6皖南花猪下丘脑组织中AdpR1、AdpR2、GnRH、GnIH mRNA表达的发育性变化

2.7相关性分析

2.8 rAdp对鼠下丘脑脂联素受体及GnRH细胞和GnIH细胞的GnRH和GnIH基因表达的影响

3 讨 论

4 结 论

参考文献

致谢

作 者 简 介

攻读硕士期间发表的学术论文