胎盘Hofbauer细胞FcγRⅢ介导HBV宫内感染

摘要

目的:探讨HBV感染孕产妇胎盘组织Hofbauer细胞表面FcγRⅢ的表达水平，探讨绒毛Hofbauer细胞FcγRⅢ表达与宿主体内HBV复制水平的相互关系以及其在介导HBV垂直传播中的作用。
　　方法:筛选58例HBV感染足月分娩产妇的和60例感染HBV的孕妇流产胎盘绒毛。以Ficoll-Hypaque分离HBV感染产妇的外周血PBMCs和其新生儿的脐血CBMCs，PCR法检测足月分娩HBV感染产妇的外周血和其新生儿脐血HBV-DNA的载量。以胰酶联合EDTA消化液消化新鲜的绒毛组织，以RPMI1640完全培养液悬浮制备细胞悬液，分别采用Ficoll-Hypaque和Percoll密度梯度离心法分离Hofbauer细胞，以台盼蓝染色检测分离纯化的Hofbauer细胞的活度。取分离提纯后的Hofbauer细胞悬液，以RPMI1640完全培养液调整纯化后的细胞浓度为(1-2)×106/mL，以PCR法检测Hofbauer细胞内HBV-DNA载量。取分离纯化的Hofbauer细胞悬液以Trizol进行总RNA的提取，逆转录以随机引物合成cDNA，检测Hofbauer细胞FcγRⅢ的mRNA表达，以lgcDNA/lgGAPDH的比值代表FcγRⅢmRNA的最终含量，对比分析FcγRⅢmRNA的表达和HBV-DNA载量间相互关系;HE染色和SP法免疫组织化学染色进一步检测HBV感染孕妇绒毛Hofbauer细胞FcγRⅢ表达与HBV感染水平的关系，分析不同的HBV感染类型孕产妇组织Hofbauer细胞FcγRⅢ表达水平。
　　结果:HBeAg(+)足月分娩产妇的PBMCs及其新生儿CBMCs内HBV-DNA检出率和HBV病毒载量都高于HBeAg(-)者，差异有统计学意义(P＜0.05)。其中，PBMCs内高病毒载量组的新生儿血清和CBMCs内HBV-DNA检出率均较高。在早期流产孕妇标本检测发现HBeAg(+)孕妇流产绒毛Hofbauer细胞内HBV-DNA阳性率较高，达46.4％(13/28)，且阳性者病毒载量较高，与HBeAg(-)者相比，HBeAg(+)孕妇流产绒毛Hofbauer细胞内HBV-DNA阳性检出率较高，有统计学差异(P＜0.05)。以PCR法对Hofbauer细胞内HBV-DNA(+)进一步检测发现CD16mRNA较正常者增加，与HBV-DNA(-)者相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，且Hofbauer细胞CD16 mRNA表达与其HBV-DNA载量有较好的相关性（r=0.65，P＜0.05）。HBV-DNA(+)组Hofbauer细胞内FcγRⅢ表达明显强于HBV-DNA(-)组，经统计学分析差异有统计学意义(P＜0.05)。细胞免疫组化染色法结果显示HBV感染孕妇和正常流产绒毛Hofbauer细胞内均见CD16表达，细胞胞膜和在细胞质可见棕色颗粒，其中HBV感染产妇绒毛中的Hofbauer细胞数量增加且CD16着色较正常对照明显增强，同时HBV-DNA(+)者的Hofbauer细胞着色较HBV-DNA(-)者的Hofbauer细胞更明显。HBV感染组胎盘Fcγ RⅢ mRNA表达较正常组有所升高，差异统计学意义(P＜0.05)，其中宫内感染组的FcγRⅢ mRNA表达较非宫内感染组明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:Hofbauer细胞为胎盘的巨噬细胞，主要存在于绒毛间质中，Hofbauer细胞在抵抗病原微生物感染胎盘的同时，亦可受HBV侵染。Hofbauer细胞是否能被HBV感染与宿主HBeAg表达和HBV-DNA载量相关。FcγRⅢ是Hofbauer细胞的关键受体，是细胞活化的重要标志。Hofbauer细胞表面FcγRⅢ的表达与宿主乙肝病毒的载量相关。SP法免疫组织化学染色显示FcγRⅢ主要表达在Hofbauer细胞胞膜和胞质中，呈棕色颗粒其表达强弱与宿主体内病毒复制水平和HBV载量正相关。HBV感染Hofbauer细胞后，可激活细胞体内级联信号传导系统，使Hofbauer细胞内FcγRⅢ表达增强，FcγRⅢ与母体循环的HBsAg-抗HBsAg等免疫复合物结合引起细胞免疫或淋巴因子的转录，介导HBV宫内感染。

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引言

第一部分 胎盘Hofbauer细胞FcγRⅢ介导HBV宫内感染研究进展

1．1 胎盘的结构和功能

1．2 Hofbauer细胞的生物学特性

1．3 Hofbauer细胞表面受体-FcγRⅢ

1．4 胎盘Hofbauer细胞在介导HBV感染的作用

第二部分 HBV感染孕妇流产胎盘Hofbauer细胞分离、纯化与鉴定

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果

2．4 讨论

第三部分 HBV感染孕产妇胎盘Hofbauer细胞FcγRⅢ表达

3．1 引言

3．2 材料和方法

3．3 结果

3．4 讨论

结论

参考文献

致谢

作者简介及读研期间主要科研成果