TLR3与胎盘细胞凋亡在胎盘HBV感染及HBV宫内感染中的作用

摘要

目的：
　　 ①了解HBsAg阳性孕妇胎盘细胞的凋亡情况。②探讨TLR3及胎盘细胞凋亡与胎盘HBV感染的关系。③探讨TLR3与胎盘细胞凋亡在HBV宫内感染中的作用。
　　 方法：
　　 1.选择2003年7月至2004年6月由太原市区各级医院筛检，于太原市传染病医院妇产科产前检查并分娩的HBsAg阳性孕妇136例为研究对象，同期选择于山西医科大学第一附属临床医院产前检查并分娩的无孕期感染史、无妊娠并发症的正常孕妇30例为对照。收集HBsAg阳性孕妇及正常孕妇分娩时的胎盘组织，采集HBsAg阳性孕妇肘静脉血及其新生儿股静脉血各2ml，同时收集研究对象的流行病学基线材料。进行了下述研究：①采用ELISA法检测血清HBsAg，荧光定量PCR法定量检测血清HBVDNA；②采用免疫荧光双标记法检测胎盘组织中HBsAg和TLR3；③采用Tunel法检测胎盘细胞的凋亡情况。
　　 2.选择2008年12月至2009年1月由太原市区各级医院筛检，于太原市传染病医院妇产科产前检查并分娩的检测为HBV宫内感染的HBsAg阳性孕妇20例，分别按1∶3和1∶2的比例匹配同期分娩的非宫内感染孕妇60例及正常孕妇40例。无菌采集孕妇分娩时胎盘组织，提取总RNA，采集HBsAg阳性孕妇肘静脉血及其新生儿股静脉血各2ml。进行了下述研究：①采用ELISA法检测血清HBsAg，荧光定量PCR法定量检测血清HBVDNA；②采用Real-timeRT-PCR检测TLR3mRNA及caspase3mRNA的表达。
　　 结果：
　　 ①采用Tunel法检测胎盘凋亡情况，比较各组凋亡指数：HBsAg阳性孕妇凋亡指数显著高于正常孕妇(t=37.834，P＜0.001)，但各血清HBVDNA含量组凋亡指数无统计学差异(F=0.727，p=0.487)；胎盘HBV感染组凋亡指数显著低于胎盘非感染组(t=2.614，p=0.010)；TLR3阳性组与TLR3阴性组凋亡指数无统计学差别(t=1.162，p=0.247)；HBV宫内感染组和非宫内感染组的凋亡指数无统计学差异(t=-1.956，p=0.053)。
　　 ②采用实时荧光定量RT-PCR检测足月胎盘TLR3mRNA及caspase3mRNA的表达，比较各组差异。TLR3mRNA的相对表达量：HBsAg阳性孕妇组高于正常孕妇组，差别有统计学意义(t=-21.714，P＜0.0001)，但是各血清HBVDNA含量组无统计学差异(F=0.727，P=0.487)；HBV宫内感染组和非宫内感染组无统计学差异(t=1.685，P=0.096)。caspase3mRNA的相对表达量：HBsAg阳性孕妇组高于正常孕妇组，差别有统计学意义(t=-2.467，P=0.015)，但各血清HBVDNA含量组无统计学差异(F=1.151，P=0.322)；HBV宫内感染组与非宫内感染组无统计学差异(t=1.826，P=0.072)。
　　 ③对足月胎盘TLR3mRNA及caspase3mRNA的相对表达量作相关性分析显示：在正常孕妇组中，Caspas3Ct/GAPDHCt值与TLR3_Ct/β-actinCt值呈负相关关系(r=-0.479，p=0.002)；而在HBsAg阳性孕妇组中未发现两变量有相关性(r=0.106，p=0.351)，进一步在宫内感染组和非宫内感染组中分别做两变量的相关性分析，均无统计学意义(r=-0.152，p=0.512；r=0.162，p=0.221)。
　　 结论：
　　 ①正常孕妇足月胎盘凋亡指数和caspase3mRNA的相对表达量均低于HBsAg阳性孕妇，说明HBV可引起胎盘细胞凋亡增加。
　　 ②在HBsAg阳性孕妇中，胎盘HBV感染组凋亡指数显著低于胎盘非感染组，提示胎盘细胞凋亡可能是HBV胎盘感染的保护因素。
　　 ③正常孕妇足月胎盘TLR3mRNA的相对表达量显著低于血清HBsAg阳性孕妇，提示HBV感染能上调胎盘TLR3的表达。
　　 ④在血清HBsAg阳性孕妇中未发现TLR3与胎盘细胞凋亡存在相关性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：常用缩写词中英文对照表

声明

前言

第一章 胎盘细胞凋亡与胎盘HBV感染的关系

1对象及方法

1.1研究对象

1.2材料与仪器

1.3胎盘标本的采集和制备

1.4实验方法

1.5统计分析方法

2.结果

2.1一般情况

2.2胎盘组织的凋亡情况

2.3胎盘凋亡与血清HBV感染

2.4HBsAg阳性孕妇胎盘组织HBV感染情况

2.5胎盘凋亡与胎盘HBV感染的关系

3.讨论

第二章 TLR3与胎盘细胞凋亡在HBV宫内感染中的作用

1.对象和方法

1.1胎盘组织TLR3的检测

1.2.胎盘组织TLR3 mRNA和Caspas3 mRNA的检测

1.3.HBV宫内感染的判定

1.4统计分析方法

2.结果

2.1胎盘组织TLR3的表达

2.2胎盘组织TLR3 mRNA含量与HBV宫内感染的关系

2.3胎盘组织Caspas3 mRNA的含量及与血清HBV感染的关系

2.4胎盘细胞凋亡与HBV宫内感染

2.5胎盘细胞凋亡与胎盘TLR3表达的关系

3讨论

小结及研究特色

参考文献

综述：胎盘细胞凋亡的研究进展

个人简历

致谢