大肠杆菌丙氨酸产生菌的构建及转录组分析

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第一章 绪论

1.1 L-丙氨酸简介

1.2.1 医药及保健品

1.2.2 食品及食品添加剂

1.2.3 其它领域

1.3 L-丙氨酸的生产现状

1.4 大肠杆菌丙氨酸代谢相关途径

1.5 CRISPR/Cas9技术

1.6 L-丙氨酸的测定方法

1.7 转录组学分析

1.8 研究意义与创新点

第 二 章 大肠杆菌L-丙氨酸产生菌的构建

2.1 引言

2.2.1 菌种

2.2.2 质粒

2.2.3 培养基配制

2.2.4 引物序列

2.2.5 主要仪器

2.3 实验方法

2.3.1 CRISPR/Cas9系统质粒的构建及转化

2.3.2 Donor DNA制备

2.3.3 pCas质粒诱导、重组质粒与Donor DNA共转化

2.3.4 菌落PCR鉴定

2.3.5 质粒消除

2.4 其它基因的敲入与敲除

2.5 结果与分析

2.5.1 frdA敲除且在同一位点进行alaD敲入

2.5.2 菌落PCR验证 frdA敲除且在同一位点进行alaD敲入

2.5.3 adhE敲除且在同一位点进行alaE敲入

2.5.4 菌落PCR验证adhE敲除且在同一位点进行alaE敲入

2.5.5 ackA-pta敲除

2.5.6 菌落PCR验证ackA-pta敲除

2.6 本章小结

第 三 章 菌株发酵及L-丙氨酸含量测定

3.1 引言

3.2.1 菌种

3.2.2 培养基配制

3.2.3 主要仪器

3.3.1 摇瓶发酵

3.3.2 5L发酵罐发酵

3.3.3 L-丙氨酸含量的测定

3.4 结果与分析

3.4.1 摇瓶发酵L-丙氨酸含量测定色谱图

3.4.2 发酵罐发酵L-丙氨酸含量测定色谱图

3.4.3 不同发酵方式下L-丙氨酸含量对比

3.5 本章小结

第四章 基因编辑菌株与野生型菌株转录组分析

4.1 引言

4.2.1 菌株

4.2.2 主要仪器

4.3 实验方法

4.3.1 菌株总RNA的提取

4.3.2 RNA质量检测

4.3.3 转录组分析实验流程

4.4 结果与分析

4.4.1 RNA质量检测

4.4.2 表达差异结果统计分析

4.4.3 差异表达基因的火山图(Volcano Plot)

4.4.4 差异表达基因功能富集分析

4.4.5 两菌株差异表达基因

4.5 本章小结

第五章 结论

参考文献

致谢