重组人肝再生增强因子对5/6肾切除大鼠模型肾脏保护作用的研究

摘要

目的:近年国内外对重组人肝再生增强因子(rhALR)研究多集中在肝脏,它可以促进肝脏再生、抗肝纤维化、抑制NK细胞活性等。因其在各组织器官中分布广泛,其mRNA在睾丸组织、肝脏、肾脏、胸腺等器官均有表达,不同的发育阶段及其在组织分布上的差异,充分说明了rhALR生物功能的多样性。研究发现rhALR可以促进细胞外基质的降解,发挥其抗肝纤维化作用,减轻肝细胞的损伤,促进损伤肝细胞的恢复,减轻细胞外基质的过度积聚。根据慢性肾脏病与肝脏病的发生发展过程中存在某些相似的途径,推测其对于慢性肾衰竭肾脏具有保护作用。国内外研究已证实rhALR直接或间接参与肾炎病理过程,急性肾小管损伤时刺激小管上皮细胞DNA合成等,但目前尚缺乏其在慢性肾衰竭的治疗方面的研究。本课题拟在通过给予重组肝再生增强因子,同时观察与慢性肾衰竭具有明确相关性的因子、蛋白的变化,以了解给予重组肝再生增强因子对于慢性肾衰竭的保护作用,为临床治疗提供新的思路。　　 肾纤维化作为许多肾脏疾病的结局,是慢性肾衰竭的病理基础。肾纤维化包括肾小球硬化和肾间质纤维化两个方面。作为慢性肾衰竭的终末期表现,其程度直接关系到慢性肾衰竭的程度及预后。肾小球硬化形成的主要原因是细胞外基质在肾小球基底膜过度沉积,突出表现为细胞外基质增加和肾固有细胞增生或消失。肾间质纤维主要表现为肾小管萎缩消失,肾间质单个核细胞浸润和纤维硬化。有关研究表明,血小板生长因子(PDGF)是由血小板、单核巨噬细胞、肾小球系膜细胞(GMCs)和肾小管上皮细胞分泌的多肽因子。其家族包括PDGF-AA、BB、CC和DD,其中PDGF-BB在肾小球硬化中作用尤为重要。其主要的生理作用是促进DNA合成,在病理状态下由单核巨噬细胞和肾组织固有细胞过度分泌,通过促进GMCs增殖与分泌细胞外基质(ECM)增多,与转化生长因子-β(TGF-β)发挥协同作用等途径,从而导致肾小球硬化的发生。在肾小管上皮-间充质细胞转化过程中,肾小管上皮细胞逐渐失去原有形态,而表现出成纤维细胞的特征,如表达平滑肌肌动蛋白(a-SMA)增加;同时细胞外基质不断更新和降解的动态平衡失调,肾小管上皮细胞向间质移行,通过刺激肾小管上皮细胞增殖,表型转化或间质成纤维细胞增殖,进而导致过度分泌Ⅲ型胶原,使细胞外基质过度聚积,从而导致肾间质纤维化。　　 本课题拟在通过研究rhALR对5/6肾切除模型大鼠PDGF-BB、a-SMA和Ⅲ型胶原表达的影响,从而探讨其对5/6肾切除模型大鼠肾脏的保护作用。　　 方法:　　 随机分为三组,假手术组(n=20),仅暴露肾包膜,不做肾切除。手术组(n=40),在严格无菌条件下,切除右肾,一周后切除左肾2/3。手术组大鼠术后饲养一周后,随机分为对照组(n=20),干预组(n=20)。干预组大鼠于手术后12周给予rhALR200μg/kg/d,腹腔注射,连续注射14天。于用药结束后24小时杀死动物,留取肾脏组织。　　 检测项目:1应用血生化测定仪测定不同组肌酐、尿素氮值。2HE、Masson染色,光镜下观察肾脏病理学改变。3免疫组织化学法检测PDGF-BB蛋白、肾间质平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、Ⅲ型胶原。4.Western印迹法检测肾组织中PDGF-BB蛋白、肾间质平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、Ⅲ型胶原表达。　　 所有计量数据以-x±s表示,行正态性检测及方差齐性检验,统计学处理组间比较应用多个样本的Q检验,统计学分析通过SPSS13.0 forWindows软件完成。　　 结果:　　 光镜下假手术组肾小球、肾小管结构正常。对照组可见多个肾小球硬化,系膜区增宽,系膜细胞明显增生,病变肾小球周围小管上皮细胞肿胀明显或者萎缩,基底膜明显增厚皱缩,肾间质纤维化明显。干预组系膜细胞增生较轻,纤维化程度较对照组明显减轻。免疫组织化学:假手术组肾组织PDGF-BB蛋白极少表达,对照组和干预组较假手术组均增强,均具有显著差异(P＜0.05);假手术组肾组织a-SMA蛋白仅在肾小动脉壁表达,肾小球和肾间质几乎无表达。对照组和干预组肾小球内、肾小管和肾间质均可见阳性表达,与假手术组比较具有显著差异(P＜0.05);假手术组肾组织Ⅲ型胶原在肾小管上皮和间质少量沉积,对照组和干预组肾小管和肾间质Ⅲ型胶原沉积成条索状或小片状分布,较假手术组表达显著增强,具有显著差异(P＜0.05)。3项指标干预组较对照组明显减弱,具有显著差异(P＜0.05)。Western-blot结果:假手术组肾组织PDGF-BB蛋白极少表达,对照组和干预组表达均明显增强,具有显著差异(P＜0.05):假手术组肾组织a-SMA表达较少。对照组和干预组表达量明显增强,具有显著差异(P＜0.05)。2项指标干预组较对照组明显减弱,具有显著差异(P＜0.05)。　　 结论:　　 rhALR可以降低慢性肾衰竭大鼠PDGF-BB在肾脏的表达,减少肾小球系膜细胞增殖与细胞外基质(ECM)分泌,减少肾小球硬化;同时降低平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达,进而抑制Ⅲ型胶原的分泌,降低细胞外基质过度聚积,从而减弱肾间质纤维化。rhALR对于5/6肾切除慢性肾衰竭大鼠模型肾脏具有保护作用。

目录

文摘

英文文摘

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 PDGF-BB、a-SMA和Ⅲ型胶原对慢性肾衰竭的影响

致谢

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