基于内质网应激PERK/CHOP通路研究枳实调控大鼠胃Cajal间质细胞凋亡的机制

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摘要

前言

第一部分 TM诱导ICC内质网应激-细胞凋亡模型的建立

1材料

1．1实验动物

1．2实验试剂

1．3实验仪器

1．4实验耗材及一般实验器材

1．5主要试剂配制

2方法

2．1 ICC细胞的分离、培养与鉴定

2．2 ICC细胞内质网应激-细胞凋亡模型建立与细胞分组

2．3 CCK-8法检测不同浓度TM对ICC细胞活性的影响

2．4 Hoechst 33342染色检测凋亡

2．5透射电镜观察TM干预后各组ICC超微结构

2．6 Annexin V-FITC／PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡

2．7 RT-PCR检测各组ICC细胞PERK、CHOP、Bax、Bcl-2 mRNA表达

2．8统计学处理

3结果

3．1 ICC的形态学观察与免疫荧光鉴定

3．2各组ICC细胞活性的比较

3．3各组Hoechst 33342染色检测细胞凋亡的比较

3．4各组ICC超微结构的变化

3．5各组流式细胞术检测细胞凋亡的比较

3．6不同浓度TM干预不同时间后各组ICC基因表达的比较

4讨论

4．1 ICC的原代培养

4．2 ICC内质网应激-细胞凋亡模型的建立

第二部分枳实对TM诱导的ICC细胞内质网应激-细胞凋亡的影响及其机制研究

1材料

1．1实验动物

1．2实验药物

1．3实验试剂

1．4实验仪器

1．5一般实验耗材及器材

1．6主要试剂配制

2方法

2．1高效液相分析枳实水煎液及含药血清中的有效成分

2．2 ICC原代细胞培养与鉴定

2．4 CCK-8法检测各组ICC细胞活性

2．8统计学处理

3结果

3．1枳实水煎液及含药血清中的有效成分

3．2 ICC免疫荧光鉴定

3．3各组ICC细胞活性的比较

3．4各组ICC超微结构的变化

3．5各组ICC细胞凋亡的比较

3．6各组ICC细胞Bax、Bcl-2、CHOP、PERK mRNA表达的比较

4讨论

4．1枳实水煎液及含药血清的有效成分

4．2枳实对ICC内质网应激-细胞凋亡PERK-CHOP通路的影响

结论

参考文献

综述 内质网应激与凋亡的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文