柴胡疏肝散对功能性消化不良大鼠内质网应激相关分子GRP78、JNK蛋白及mRNA表达的影响

摘要

目的：探讨柴胡疏肝散对功能性消化不良(functional dyspepsia，FD)大鼠内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白(GRP78)和c-Jun氨基末端激酶（JNK）蛋白及mRNA表达的影响。　　方法：将36只SPF级大鼠，按照随机数字表法将其分成正常组、模型组、柴胡疏肝散低浓度组、中浓度组、高浓度组、多潘立酮组，各组6只。除正常组大鼠外，其余各组大鼠每日早晚以改良版“郭氏”夹尾刺激法制备FD模型，然后于造模同一天开始分别予以对应药物水溶液灌胃，每100g体重灌胃1.5ml（柴胡疏肝散低、中、高剂量分别为0.16g/ml，0.32g/ml和0.64g/ml、多潘立酮0.30mg/ml），模型组予以生理盐水灌胃，持续4w。造模期间记录大鼠体重、饮食饮水的变化;观察是否有扎堆、易激惹表现以及毛发的粗糙度和光泽有无变化。造模4w后，采用半固体糊灌胃法测定胃排空率，所有大鼠麻醉后取血取胃，观察胃黏膜表面情况，有无潮红、溃疡或糜烂等现象。Elisa检测各组大鼠血清GRP78、JNK蛋白含量，Real-Time PCR技术检测胃窦组织GRP78、JNK mRNA的表达，免疫组化法检测各组大鼠胃窦组织中GRP78、JNK蛋白的表达。　　结果：①大鼠一般情况的结果比较：在造模2w内，各组大鼠易激惹、打斗现象出现频次较多，各组之间无明显差异。从第4w开始，模型组大鼠表现出扎堆、活跃性降低、困倦、饮食饮水减少、毛发枯燥等现象;柴胡疏肝散不同浓度组及多潘立酮组的上述表现存在但程度较轻。与模型组比较，柴胡疏肝散低、中、高浓度组，多潘立酮组大鼠体重增长，但无显著差异(P＞0.05);与正常组比较，模型组大鼠体重增长量明显减少，存在统计学意义（P＜0.05）;②胃大体解剖后，正常组大鼠胃内存有少量半固体糊，胃黏膜表面完整、平滑、颜色呈淡红色。模型组大鼠胃内半固体糊明显较多且胃黏膜均出现潮红，程度不一，无明显溃疡、糜烂。柴胡疏肝散不同浓度组及多潘立酮组大鼠胃内半固体糊存留量较模型组少，但多于正常组大鼠，且胃黏膜潮红程度较模型组轻。③各组大鼠胃排空率的比较：与正常组比较，模型组中各大鼠的胃排空率均明显降低(P＜0.05)，与模型组比较，柴胡疏肝散不同浓度组及多潘立酮组胃排空率升高(P均＜0.05);④各组大鼠血清GRP78、JNK蛋白含量的结果比较：与正常组比较，模型组大鼠血清GRP78、JNK蛋白含量明显升高(P＜0.05);与模型组比较，柴胡疏肝散低、中、高浓度组及多潘立酮组血清GRP78、JNK蛋白含量降低（P均＜0.05）;⑤各组大鼠胃窦组织GRP78、JNK mRNA表达结果的比较：与正常组比较，模型组胃窦组织GRP78、JNK mRNA表达较正常组升高（P＜0.05）;与模型组比较，各用药组GRP78、JNK mRNA表达降低（P均＜0.05）;⑥各组大鼠胃窦组织GRP78、JNK蛋白表达结果的比较：与正常组比较，模型大鼠胃窦组织GRP78、JNK蛋白水平明显升高(P＜0.05);与模型组比较，柴胡疏肝散低、中、高浓度组以及多潘立酮组大鼠胃窦组织GRP78、JNK蛋白表达显著降低（P＜0.05）。　　结论：柴胡疏肝散可以有效的促进功能性消化不良大鼠的胃动力，其机制可能与减少内质网应激相关分子GRP78、JNK蛋白及mRNA的表达有关。

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个人简历

部分英文缩略语中文对照

摘要

前言

1材料

1．1实验动物

1．2药物

1．3实验中主要试剂

1．4实验用一般试剂

1．5实验仪器

1．6实验用一般耗材

1．7实验用药物和溶液配置

2方法

2．1动物分组及模型建立

2．2大鼠胃排空率的测定

2．3实验标本采集

2．4 Elisa法检测大鼠血清中JNK、GRP78蛋白表达量

2．5采用Real-Time PCR技术检测大鼠胃窦组织JNK、GRP78 mRNA表达

2．6免疫组织化学法检测大鼠胃窦组织中GRP78、JNK蛋白表达

2．7统计学处理

3结果

3．1各组大鼠体重增长情况对比

3．2造模期间各组大鼠一般情况及胃窦组织学观察

3．3不同药物干预后大鼠的胃排空率比较

3．5各组大鼠药物干预后胃窦组织中GRP78、JNK mRNA的表达情况

3．6各组大鼠药物干预后胃窦组织中GRP78、JNK的免疫组化结甲7K

4讨论

4．1柴胡疏肝散对功能性消化不良大鼠胃动力的影响

4．2肝之气郁与功能性消化不良的关系

4．3功能性消化不良与内质网应激

4．4柴胡疏肝散对内质网应激相关分子GRP78、JNK的影响

5结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间发表的学术论文