内质网应激因子IRE1、TRAF2在功能性消化不良大鼠胃窦中的表达及柴胡疏肝散的影响

摘要

目的:观察柴胡疏肝散对功能性消化不良大鼠胃窦组织内质网应激因子肌醇需求酶1(IRE1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的影响。
　　方法:取SPF级SD大鼠30只按照随机分配原则分为5组，每个组别大鼠6只，5个组别分别为正常组、模型组、生理盐水组、柴胡疏肝散组和多潘立酮组。除正常组正常饲养外，其余组进行夹尾激惹刺激，持续4周，用浓度为0.22g/ml的柴胡疏肝散水煎液按照1.5ml/100g剂量给柴胡疏肝散组大鼠灌胃;多潘立酮组予多潘立酮溶液（浓度为0.21mg/ml），剂量1.5ml/100g;生理盐水组给予等量生理盐水（浓度为0.9％）灌胃;模型组只夹尾不灌药。造模过程中，观察大鼠一般情况改变。干预4周后，解剖观察大鼠胃窦组织大体情况，检测各组大鼠胃排空率，取胃窦组织行HE染色观察组织学改变，免疫组织化学法观察各组IRE1、TRAF2蛋白表达情况，用RT-qPCR检测胃窦组织内质网应激基因IRE1、TRAF2的相对表达量，琼脂糖凝胶电泳检测IRE1、TRAF2基因表达情况。
　　结果:4周不间断夹尾造模期间，大鼠由开始的温顺、正常活动、毛发光滑逐渐开始出现攻击性增加、易受惊吓、咬人、扎堆、毛发粗糙等现象，与模型组比较，给予柴胡疏肝散水煎液灌胃的大鼠上述表现相对不明显。大鼠造模结束之后，解剖观察大鼠胃内残留物和胃窦组织大体变化，模型组和生理盐水组胃内残留物较多，与模型组比较，柴胡疏肝散组和多潘立酮组胃内残留物显著下降，各组大鼠胃黏膜无明显溃疡、潮红、坏死、肿胀等变化。HE染色病理学检查各组大鼠胃窦组织均未见明显炎性细胞浸润、结构异常，无器质性病变。胃排空率测定，生理盐水组、模型组胃排空率较正常组降低(P＜0.05)，柴胡疏肝散组和多潘立酮组胃排空率较模型组增高(P＜0.05)。免疫组化结果显示，与正常组大鼠比较，模型组和生理盐水组内质网应激蛋白IRE1、TRAF2水平显著升高;与模型组比较，多潘立酮组、柴胡疏肝散组内质网应激蛋白IRE1、TRAF2表达则表现出下调趋势(P＜0.05)。RT-qPCR结果显示，柴胡疏肝散组和多潘立酮组的内质网应激基因IRE1、TRAF2的表达较模型组降低(P＜0.05)，而模型组和生理盐水组内质网应激基因IRE1、TRAF2的表达较正常组显著升高(P＜0.05)，琼脂糖凝胶电泳所测蛋白条带符合IRE1、TRAF2的分子量。
　　结论:功能性消化不良大鼠存在胃动力障碍，柴胡疏肝散可以改善FD大鼠的胃动力障碍，其发挥作用的机制可能与抑制内质网应激因子IRE1、TRAF2的表达有关。

目录

声明

个人简历

部分英文缩略语名词对照

摘要

前言

1．1 实验动物

1．2 实验药物

1．3 实验主要试剂

1．4 实验一般试剂

1．5 仪器

1．6 实验耗材

1．7 主要试剂溶液的配置

2 方法

2．1 FD大鼠模型制备

2．2 标本收集

2．3 胃排空率测定

2．4 各组大鼠胃窦组织HE染色

2．5 免疫组化法检测大鼠胃窦IRE1、TRAF2蛋白表达

2．6 RT-qPCR检测胃窦组织IRE1、TRAF2基因的表达

2．6．1 提取胃窦组织总RNA

2．6．2 RNA纯度分析

2．6．3 逆转录过程

2．6．4 Real Time PCR

2．6．5 Real Time PCR数据分析

2．7 琼脂糖凝胶电泳检测RT-qPCR产物

2．8 统计学处理

3 结果

3．1 各组大鼠一般情况及胃窦组织学大体观察

3．2 各组大鼠胃窦组织病理检查结果

3．3 各组大鼠胃排空率的比较

3．4 各组大鼠胃窦组织IRE1、TRAF2蛋白表达比较

3．4．2 各组大鼠胃窦组织IRE1、TRAF2蛋白表达量的比较

3．5 各组大鼠胃窦组织IRE1、TRAF2基因表达比较

3．6 各组大鼠胃窦组织IRE1、TRAF2基因RT-qPCR产物琼脂糖凝胶电泳结果比较

4 讨论

4．1 FD与胃动力障碍之间的关系

4．2 FD与内质网应激蛋白IRE1、TRAF2的关系

4．3 柴胡疏肝散对FD大鼠胃动力和内质网应激因子IRE1、TRAF2的影响

5 结论

参考文献

综述

致谢

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