短节白毫红绿茶抑制HepG2细胞增殖与迁移的机制研究

摘要

茶叶不仅是一种天然饮料,自古就有"以茶入药"的传统,虽不能说"万病之药",但大量的科学研究表明,茶叶具有很好的防癌抗癌作用.本文旨在探究茶叶活性成分对于肝细胞肝癌的潜在治疗机制,主要进行以下三方面的研究:　　1. 短节白毫,是一种无性系云南大叶种茶树良种,通过基础生化成分分析可知,短节白毫绿茶多酚类总量达14.77%,远大于红茶5.62%,多酚类化合物是茶叶主要的功能性成分,特别是儿茶素类EGCG,大量研究表明,EGCG可以诱导细胞凋亡,抑制癌细胞转移和侵染,还可以调控各种信号通路,从而影响肿瘤细胞的增殖、转移及侵袭,经生化成分测定,短节白毫绿茶中EGCG含量为44.86mg/g,总儿茶素含量为106.20 mg/g.短节白毫红茶,由于跟绿茶制作工序的差异(主要是发酵过程),茶叶中的多酚类发生大量转化,生成茶黄素(TFs)、茶红素(TRs)茶褐素(TB)等茶色素,茶色素类成为红茶中最为主要的功能性成分,经生化成分测定,短节白毫红茶中茶色素类总量占干重的9.70%.红茶色素类表现出良好的生物学活性,如清除自由基和抗氧化活性、抗肿瘤活性等.　　2. 接下来通过FRAP法、DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除法分别测定了短节白毫茶抗氧化能力,综合比较红茶和绿茶体外抗氧作用强弱.茶叶的抗氧化作用是茶叶保健功能的重要研究内容,同时也是茶叶抗癌作用的重要机理.本文研究结果显示:总体来说,短节白毫茶的抗氧化能力大小:绿茶>红茶,且两种茶类的抗氧化活性在一定浓度范围内皆呈剂量依赖性.　　3. 最后,本文以短节白毫红绿茶提取物为研究对象,探究其诱导人肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞迁移及侵袭的作用和分子机制.主要结论如下:短节白毫红绿茶处理后, HepG2细胞变圆,染色质固缩,呈现典型的凋亡形态变化.MTT实验、克隆集落形成实验说明短节白毫红绿茶提取物能抑制HepG2细胞生长,并呈剂量和时间依赖关系.其作用机制可能是抑制PI3K/AKT信号通路、激活Caspase-3、引起促凋亡蛋白Bax表达上调而抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调.同时也揭示了线粒体途径(内源性途径)介导短节白毫红绿茶诱导的细胞凋亡.另外,划痕实验、Transwell实验结果显示:短节白毫红绿茶提取物抑制了HepG2细胞迁移及侵袭作用,并呈一定剂量依赖性,且绿茶抑制作用大于红茶.

目录

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1.1 肝细胞肝癌

1.2 肝癌治疗分子靶向药物

1.3 肝癌细胞的凋亡调控

1.4 茶叶抗癌作用

1.4.1 绿茶抗癌作用

1.4.2 红茶抗癌作用

1.5 研究目的及意义

1.6 技术路线

第二章 短节白毫红绿茶品质评价及生物活性物质基础研究

2.1 短节白毫红绿茶感官审评

2.1.1 材料及仪器

2.1.2 感官审评方法

2.1.3 感官审评结果及分析

2.2 短节白毫红绿茶常规生化成分分析

2.2.1 实验材料与仪器

2.2.2 实验方法

2.2.3 结果分析与讨论

3.1 引言

3.1.2 体外抗氧化研究方法

3.1.3 茶叶抗氧化作用

3.2 短节白毫红绿茶提取物抗氧化活性测定

3.2.1 茶样水提物的制取

3.2.2 FRAP法测定总抗氧化能力

3.2.3 DPPH自由基清除法

3.2.4 ABTS+自由基清除法

3.3 实验结果及讨论

3.3.1 FRAP法总抗氧化能力

3.3.2 DPPH自由基清除能力

3.3.3 ABTS+自由基清除能力

3.4 小结

4.1 短节白毫红绿茶抑制HepG2细胞的增殖作用

4.1.1 HepG2细胞形态学变化

4.1.2 细胞克隆集落形成实验

4.1.3 MTT细胞增殖测定

4.1.4 流式凋亡分析

4.2 短节白毫红绿茶抑制HepG2细胞迁移及侵袭的作用

4.2.1 划痕实验

4.2.2 Transwell实验

5.1 PI3K/AKT信号通路

5.2 肿瘤细胞凋亡途径及机制

5.3 肿瘤细胞的迁移及侵袭

5.4 Western Blot免疫印迹分析

5.4.1 材料及仪器

5.4.2 实验方法

结 论

致 谢

参 考 文 献