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丙戊酸钠对体外培养的小鼠胚胎细胞增殖和分化的影响

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前言

第一部分丙戊酸钠对小鼠胚胎肢芽细胞增值和分化的影响

材料与方法

结果

讨论

第二部分丙戊酸钠对小鼠胚胎中脑细胞增殖和分化的影响

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

攻读学位期间发表的论文

致谢

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摘要

目的 观察体外培养的小鼠胚胎中脑细胞和肢芽细胞在不同剂量丙戊酸钠的作用下增殖和分化的变化,探讨丙戊酸钠体外发育毒性的特点,揭示其致畸性和作用机理。 方法 根据Flint等报道的微团培养方法,在本实验室建立小鼠中脑神经细胞和肢芽细胞微团培养模型,从12天龄小鼠胚胎中分离出中脑神经细胞和后肢芽细胞,体外暴露于不同剂量的丙戊酸钠(终浓度分别是0、25、50、75、100、150和200mg/l)连续培养5天。5天后,应用噻哗蓝(MTT)比色方法评估细胞增殖状况,并估算出细胞集落形成抑制水平,来反映丙戊酸钠对体外培养的中脑神经细胞和肢芽细胞增殖和分化的影响。 结果 1.不同剂量的丙戊酸钠对体外培养的胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用,并有明显的剂量一效应关系(r=-0.950,r=-0.968,P<0.05),其半数增殖抑制浓度(IP<,50>)和半数分化抑制浓度(ID<,50>)分别是99.31mg/l,64.82mg/l,IP<,50>/ID<,50>=1.53。 2.不同剂量的内戊酸钠对体外培养的胚胎中脑神经细胞的增殖和分化均有抑制作用,并有明显的剂量-效应关系(r=-0.961,r=-0.938,P<0.05),其半数增殖抑制浓度(IP<,50>)和半数分化抑制浓度(ID<,50>)分别是124.46mg/l,90.79mg/l,IP<,50>/ID<,50>=1.37。 结论 根据Flint,renault等人提出的体外致畸实验判断标准,丙戊酸钠是小鼠胚胎中脑细胞和肢芽细胞分化的特异性抑制剂,具有潜在的致畸性。

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