唑来膦酸对小鼠胚胎成骨细胞增殖和分化的影响

摘要

目的 研究唑来膦酸对小鼠胚胎成骨细胞体外增殖和成骨分化的影响.方法 将小鼠胚胎成骨细胞体外传代培养,使用含不同浓度(1.0、0.1 μmol/L)唑来膦酸的成骨诱导培养基干预细胞,不含唑来膦酸的培养基作对照,培养1、3、5d采用CCK 8试剂盒检测唑来膦酸对成骨细胞增殖的影响;培养14 d行碱性磷酸酶(ALP)染色;培养21 d行茜素红染色;培养7d,实时定量聚合酶链式反应(Real time PCR)检测转录因子Runx2、成骨标志物Ⅰ型胶原(Collagen Type Ⅰ)、ALP、骨钙素(OCN)基因的表达,免疫印迹法(Western Blotting)检测转录因子Runx2蛋白的表达.结果 不同浓度的唑来膦酸干预细胞后,CCK-8实验检测吸光度值随天数增加而升高,各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).随着唑来膦酸浓度的升高,ALP染色和茜素红染色逐渐变浅,Runx2、Collagen Type Ⅰ、ALP、OCN基因的表达量降低,Runx2蛋白的表达量降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 唑来膦酸在选定浓度(1.0、0.1 μmol/L)下不影响成骨细胞的增殖,但对其分化功能的抑制作用随着浓度的增加而增强.