下调TCF7L2对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素降解酶表达的调控作用观察

摘要

目的：探讨下调转录因子7类似物2（Transcription factor7-like2， TCF7L2）对胰岛素抵抗（Insulin resistance，IR）HepG2细胞胰岛素降解酶（Insulin degrading enzyme，IDE）表达的调控及可能机制。　　方法：细胞分组,将HepG2细胞分为空白组、TCF7L2干扰组、空载体组、IR组、IR+TCF7L2干扰组、IR+空载体组。采用高浓度胰岛素（5×10-6mol/L）持续作用24h诱导IR模型（IR-HepG2细胞）生成。以人TCF7L2 mRNA编码序列作为干扰靶点构建TCF7L2特异性小干扰RNA慢病毒载体（LV-TCF7L2-siRNA）转染空白组及IR组细胞,空载体病毒转染空载体组及 IR+空载体组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞TCF7L2及IDE mRNA的表达，Western blotting检测各组细胞TCF7L2、IDE、胰岛素刺激后蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表达的变化，流式细胞术检测各组2-脱氧-D-葡萄糖（2-NBDG）荧光葡萄糖摄取率。　　结果：与空白组比较，IR组细胞葡萄糖消耗量及2-NBDG摄取率均明显降低（P＜0.01），证明 IR细胞模型建立成功。qRT-PCR及 Western blotting结果显示，IR组TCF7L2及IDE mRNA及蛋白表达水平均明显低于空白组（P＜0.05），TCF7L2干扰组TCF7L2、IDE mRNA和蛋白表达水平较空白组、空载体组均明显下降，IR+TCF7L2干扰组TCF7L2、IDE mRNA和蛋白表达水平较IR组、IR+空载体组均明显下降（P＜0.05）。生理剂量胰岛素刺激后，IR组、IR+TCF7L2干扰组p-AKT蛋白水平较空白组明显下降（P＜0.01），各组总AKT水平差异无统计学差异（P＞0.05）。TCF7L2干扰组2-NBDG荧光葡萄糖摄取率较空白组和空载体组明显下降，IR+TCF7L2干扰组2-NBDG荧光葡萄糖摄取率较IR组、IR+空载体组明显下降（P＜0.01）。　　结论：TCF7L2可通过调控IDE表达致肝细胞IR，其机制可能与减少胰岛素信号通路关键酶p-AKT蛋白表达有关。

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英汉缩略语名词对照

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英文摘要

前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验所用仪器和设备

1.3 实验方法

1.4 统计学分析

2 实验结果

2.1 不同浓度胰岛素对细胞葡萄糖消耗量的影响

2.2 胰岛素不同作用时间对细胞葡萄糖消耗量的影响

2.3 对照HepG2细胞与胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖摄取率

2.4 TCF7L2干扰病毒转染细胞效率观察

2.5 HepG2细胞内TCF7L2、IDE mRNA表达

2.6 沉默TCF7L2对各组HepG2细胞蛋白表达影响

2.7 各组细胞2-NBDG摄取率

3 讨论

全文总结

一：全文小结

二：本研究的创新与特色

三：本研究的不足之处

参考文献

文献综述:IDE基因多态性和2型糖尿病发病风险的研究进展

附图

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文