局部联合应用rhGM-CSF和胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面愈合的影响及机制探索

摘要

目的：研究糖尿病大鼠烫伤创面局部联合rhGM-CSF和胰岛素治疗对创面愈合的影响，并探索其相关机制。　　方法：在动物实验室用常规饲料喂养60只健康雄性SD大鼠1周，编号并按随机数字表法，抽取50只SD雄性大鼠，制造糖尿病模型，12h禁食（不禁水）后，并根据大鼠体重以55mg/kg，给予新鲜配制的1％链尿佐菌素(STZ)溶液腹腔单剂量注射;并用相同剂量柠檬酸缓冲液腹腔单剂量注射实验对照组A组。3天后测血糖（取大鼠尾静脉血），对不达标者的，再次使用新鲜配制的1％STZ腹腔注射(10～15mg/kg)。大鼠的血糖稳定后（注射后继续喂养3-4周），在大鼠的背部两侧各自造成一处深Ⅱ度烫伤创面，糖尿病烫伤模型成功后（未成功造模有10只），编号并按随机数字表法分为5组：糖尿病烫伤对照组(B)、胰岛素组(C)、rhGM-CSF组(D)、胰岛素联合rhGM-CSF治疗组(E)，剩余的10只大鼠为正常烫伤对照组(A)。其中A组创面覆盖浸有5mL生理盐水的纱布治疗;B组创面覆盖浸有5mL生理盐水的纱布治疗;C组创面覆盖浸有5U诺和灵30R+5mL生理盐水的纱布治疗;D组创面覆盖浸有25ug rhGM-CSF+5mL生理盐水的纱布治疗;E组创面覆浸有5U诺和灵30R+25ug rhGM-CSF+5mL生理盐水的纱布覆盖。第3、第7、第11、第15、第21天肉眼察看各组创面的愈合情况，测定创面的愈合率，并用免疫组化检测创面的CD31、HIF-1α和VEGF阳性表达及荧光PCR法测量HIF-1αmRNA的含量。　　结果：通过随机抽取糖尿病大鼠的胰腺组织，进行组织学的观察，全部证实胰岛组织的细胞大部分遭受破坏，即糖尿病模型诱导成功。随机抽取各组烫伤创面的全层皮肤，行HE染色切片均证明：为深Ⅱ度的烫伤创面。伤后第3、7、11、15、21天各组大鼠创面均逐渐缩小或愈合，愈合率逐渐升高，其中尤以A组、E组大鼠创面组织内成纤维细胞及新生毛细血管等生长速度最快，愈合最快。烫伤后第7、11、15、21天A、C、D、E组创面愈合率较B组明显增高(p＜0.01)，具有统计学意义;A、E组创面愈合率较C、D组增高(p＜0.05)，具有统计学意义;A组与E组，C组与D比较(p＞0.05)，无统计学意义。各组VEGF阳性表达伤后就有表达，其浓度较低，之后增加，达到峰值，后逐渐回落;烫伤后第3、7、11、15、21天，A组、C组、D组、E组VEGF阳性表达高于B组(p＜0.05)，具有统计学意义;A、E组VEGF阳性表达高于C组、D组(p＜0.05)，具有统计学意义。HIF-1α的阳性表达各组在伤后就有表达，其浓度较低，之后增加，达到峰值，后逐渐回落;烫伤后第3、7、11、15、21天，A、C、D、E组HIF-1α的阳性表达明显低于B组(p＜0.01)，具有明显统计学意义;烫伤后第3、7、11天，C、D组HIF-1α的阳性表达高于A、E组(p＜0.05)，具有明显统计学意义。HIF-1αmRNA相对量开始含量较低，之后增加，达到峰值，后逐渐回落;第7、11、15、21天：E组HIF-1αmRNA相对量低于A、B、C、D组(p＜0.01)，具有明显统计学意义;C、D组HIF-1α的阳性表达低于B组(p＜0.01)，具有统计学意义;C组与D组之间比较(P＜0.05)，具有差异性。CD31的阳性表达伤后浓度较低，之后增加，达到峰值，后逐渐地回落;烫伤后第3、7、11、15、21天，A、E组CD31阳性表达高于B、C、D组(p＜0.05)，具有统计学意义;烫伤后第3、7、21天，C、D组CD31阳性表达高于B组(p＜0.05)，具有统计学意义;第11、15天，C、D组与B组比较无明显差异。　　结论：糖尿病烫伤创面局部联合应用胰岛素与rhGM-CSF可加速创面愈合，可能是通过促进创面的微血管再生、纠正糖尿病烫伤创面缺血缺氧、改善创面的血供等，进而加速创面愈合。其机制可能与促进VEGF的表达、抑制HIF-1α的表达有关。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

1 模型的建立

2．大体创面观察

3．创面的愈合率

4．组织学的观察

5、VEGF、HIF-1α及CD31阳性表达的相对含量及HIF-1α mRNA含量结果

讨论

1．糖尿病烫伤创面研究及意义

2．糖尿病烫伤创面大鼠模型建立方法

2．糖尿病烫伤创面VEGF、HIF-Ia、CD31的研究

4．糖尿病烫伤创面局部运用胰岛素、rhGM-CSF的研究

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

局部联合应用rhGM-CSF和胰岛素对糖尿病大鼠烫伤创面愈合的影响及机制探索 综述

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