辛伐他汀对TNBS诱导的大鼠结肠炎Th17/Treg平衡的调节作用

摘要

目的:炎症性肠病是肠道黏膜慢性复发性炎症，其机制不是很清楚，免疫反应异常是其主要机制之一。他汀类药物是HMG-CoA抑制剂，许多研究显示该类药物可作用于不同的免疫反应途径，因此能够参与免疫的调节。采用TNBS复制结肠炎模型，探讨Th17及Treg细胞失衡在其发病过程中的作用，并采用辛伐他汀干预，了解其在实验性结肠炎中的干预效应并探讨作用机理。　　方法:40只雄性SD大鼠，随机分5组:对照组（N组）、模型组（TNBS组）、辛伐他汀分为低剂量(SL组，5mg/kg)和高剂量(SH组，20mg/kg)两个组、柳氮磺嘧啶组(SASP组，400mg/kg)。后四组小鼠用5％TNBS+50％乙醇(v/v)溶液复制大鼠急性结肠炎模型，SL组和SH组在造模后分别灌胃不同剂量的辛伐他汀溶液，TNBS模型组在造模后使用相同量的生理盐水灌胃，一天一次，对照组大鼠经直肠灌注等容积的0.9％Nacl溶液后每天灌胃0.9％Nacl溶液2ml，连续7d。实验过程中，观察相关指标，每天记录并观察各组大鼠DAI评分，干预7d后，采集标本并肉眼观察结肠粘膜病变程度，行CMDI评分，HE染色后观察病理改变，并行TDI评分，以酶联免疫法(ELISA)检查血清中IL-17及IL-22、IL-10的水平，以免疫组化法检测结肠组织中IL-17、Foxp3的表达，RT-PCR检查结肠组织RORγt、Foxp3 mRNA表达量。组间比较采用单因素方差分析。　　结果:1、与对照组比较，模型及各干预组DAI、CDMI及TDI评分均升高，差异显著，具统计学意义，表明复制结肠炎模型成功。2、ELISA法检测TNBS组及各治疗组中大鼠血清中IL-17、IL-22水平，与对照组之间相较，显著升高，各个组之间相较，有显著差异(P=0.000)，不同治疗组与TNBS组之间比较，有统计学意义(P＜0.05)。各治疗组及TNBS组IL-10水平较对照组升高，差异有意义(P＜0.05)，不同治疗组与TNBS组比较明显升高，有统计学意义(P＜0.05)。3、免疫组化法结果显示:7天后，检测各组结肠粘膜组织IL-17表达，差异有意义(P＜0.05)。TNBS组IL-17表达量升高，与对照组相比较，具统计学差异(P=0.000)。TNBS组与SH组比较，有统计学意义(P=0.002)，与SL及SASP组比较差异无意义。给药后各组大鼠结肠粘膜Foxp3表达，差异具显著性(P=0.000)，与对照组相比，TNBS组中Foxp3的表达量升高，有统计学意义(P=0.010)。TNBS与SH组比较，有显著差异(P=0.000)，而与SL、SASP组相比较，无意义。4、对照组的结肠粘膜中RORγt及Foxp3较少量的表达。TNBS组中RORγtmRNA表达量较对照组明显升高，而SH组干预后，RORγtmRNA的表达显著低于TNBS组(P＜0.05)。TNBS组Foxp3有一定程度表达，经过治疗后，Foxp3 mRNA表达量明显上调，组间比较，差异具意义(P=0.000)。　　结论:1、Th17/Treg之间平衡失调与TNBS复制的结肠炎的发病过程相关。2、辛伐他汀可能抑制TNBS复制的急性结肠炎肠道炎症，其机制可能与上调Treg细胞，促进IL-10及Foxp3的表达，下调Th17细胞转化，与转录因子RORγt表达及IL-17产生减少，从而调节免疫平衡。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学分析

结果

1 模型建立

2 大鼠一般情况比较

3 结肠大体肉眼观及病理组织学评分

4 血清中细胞因子的表达

5 结肠组织中IL-17、Foxp3的表达

6 结肠组织中RORγt及Foxp3 mRNA的表达

附图

讨论

1、动物模型评价

2、Th17及Treg细胞与IBD

3、辛伐他汀对TNBS复制的大鼠结肠炎的作用及可能机制

结论

参考文献

英文缩写表

致谢

综述 白介素-22在炎症性肠病中的作用

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