马齿苋黄酮类化合物的提取、质控及其对黄曲霉菌的抑制作用

摘要

黄曲霉菌污染在粮食和饲料中广泛存在，被污染的产品不仅丧失了部分营养价值，而且其产生的黄曲霉毒素会直接和间接对人类和动物造成毒害作用。植物来源的天然防霉剂具有良好的抑菌防霉效果，还能保持粮食和饲料等产品的营养价值，同时不污染环境，对人畜安全，可提供一种较好解决黄曲霉菌污染问题的备选方法。　　本论文选取马齿苋全草作为研究对象，采用超声破碎提取法确定了其黄酮类化合物的适宜提取条件，利用高效液相色谱法构建了马齿苋黄酮类化合物提取物的批间活性稳定性评价方法，并利用生物活性导向筛选法确定了可抑制黄曲霉菌生长的有效馏分。具体研究内容和研究结果包括以下三个方面:　　(1)采用超声破碎提取法，考察了乙醇浓度、料液比、提取溶剂pH值、超声时间、超声功率、超声温度等条件对马齿苋全草黄酮类化合物提取量的影响，确定了马齿苋全草黄酮类化合物的适宜提取条件为:乙醇浓度90％,料液比1/50(g/mL)，提取溶剂pH值8.5，超声功率700w，超声时间40min，超声温度60℃。在此条件下，马齿苋全草黄酮类化合物的提取量与原料干重比例最高可达到3.85mg/g。　　(2)采用高效液相色谱法，考察了检测波长、流动相、改性剂、柱温、流速对马齿苋全草黄酮类化合物提取物高效液相色谱分离效果的影响，确定了适宜的高效液相色谱分析条件:波长为325nm、流动相为甲醇-水系统、改性剂为乙酸、流速为1mL/min、柱温为30℃。利用中药指纹图谱相似度评价系统软件评估10批马齿苋全草黄酮类化合物提取物的相似度＞0.97。经方法学验证，指纹图谱的精密度、重现性和稳定性RSD值均小于5％。处理浓度为40mg/mL时，10批马齿苋黄酮类化合物提取物对黄曲霉菌的抑制率为73.47-76.47％，抑菌活性稳定。因此确定相似度≥0.97为马齿苋全草黄酮类化合物提取物的质控点。　　(3)采用生物活性导向筛选法，考察了马齿苋全草黄酮类化合物提取物及各级馏分对黄曲霉菌生长的抑制作用，确定了马齿苋全草黄酮类化合物提取物抑制黄曲霉菌生长的有效馏分为三级馏分F6-5-3，其最低抑菌浓度为250μg/mL。

目录

声明

摘要

英文缩略表

1．1．1 黄曲霉菌的特点

1．1．2 黄曲霉菌的危害

1．1．3 现有防治方法

1．2 马齿苋黄酮类化合物抑菌作用研究现状

1．2．1 马齿苋

1．2．1 马齿苋黄酮类化合物

1．2．2 马齿苋黄酮类化合物抑菌作用研究现状

1．3 黄酮类化合物的研究进展

1．3．1 黄酮类化合物的基本结构

1．3．2 黄酮类化合物的理化特征

1．3．3 黄酮类化合物的分类情况

1．3．4 黄酮类化合物的提取方法

1．3．5 黄酮类化合物的分离纯化方法

1．3．6 黄酮类化合物的鉴定方法

1．4 植物活性成分筛选方式研究现状

1．4．1 传统筛选方式

1．4．2 生物活性导向筛选方式

1．5 本实验研究意义和内容

1．5．1 研究意义

1．5．2 研究内容

2．1 引言

2．2 实验材料

2．2．1 实验材料及试剂

2．2．2 实验仪器和设备

2．3 实验方法

2．3．1 原材料处理方法

2．3．2 黄酮类化合物含量的测定

2．3．3 马齿苋黄酮类化合物提取物提取条件的确定

2．3．4 马齿苋黄酮类化合物适宜提取条件验证

2．3．5 马齿苋黄酮类化合物提取物的制备

2．4 结果与分析

2．4．1 六种因素对马齿苋黄酮类化合物提取量的影响

2．4．2 马齿苋黄酮类化合物的适宜提取条件验证

2．5 本章小结

第三章 马齿苋黄酮类化合物提取物HPLC质控方法

3．1 引言

3．2 实验材料

3．2．1 实验材料及试剂

3．2．2 实验仪器和设备

3．3 实验方法

3．3．1 原材料处理方法

3．3．2 供试品溶液的制备

3．3．3 菌株培养

3．3．4 抑菌率的检测

3．3．5 HPLC色谱条件的优化

3．3．6 方法学验证实验

3．3．7 数据分析

3．3．8 10批马齿苋黄酮类化合物提取物对黄曲霉菌抑制率稳定性实验

3．4 结果与讨论

3．4．1 色谱条件

3．4．2 方法学验证

3．4．3 马齿苋黄酮类化合物提取物批间质量控制方法的建立

3．5 本章小结

第四章 马齿苋黄酮类化合物提取物抑制黄曲霉菌生长活性成分的筛选

4．1 引言

4．2 实验材料

4．2．1 实验材料和试剂

4．2．2 实验仪器和设备

4．3 实验方法

4．3．1 原材料处理方法

4．3．2 供试品的制备

4．3．3 菌株培养

4．3．4 抑菌率的检测

4．3．5 马齿苋黄酮类化合物提取物抑制黄曲霉菌生长实验

4．3．6 马齿苋黄酮类化合物提取物中抑制黄曲霉菌生长活性成分的筛选

4．4 结果与讨论

4．4．1 马齿苋黄酮类化合物提取物对黄曲霉菌生长的抑制作用

4．4．2 马齿苋黄酮类化合物提取物中抑制黄曲霉菌生长活性成分的筛选

4．5 本章小结

第五章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历