声明
摘要
第一章 前言
1 干细胞简介
2 干细胞研究发展简史
3 mESCs、hESCs与mEpiSCs三者之间的比较
4 mEpiSCs的培养条件
5 IWR1在mEpiSCs/hESCs自我更新中的研究进展
6 Foxd3基因的筛选
第二章 材料与方法
1 材料
2 细胞常规培养
2.1 mEpiSCs的获取
2.2 mEpiSCs的传代和培养
2.3 细胞计数
2.4 细胞冻存
2.5 细胞复苏
3 细胞状态检测
3.1 形态观察
3.2 免疫荧光
3.3 Western blot
3.4 荧光实时定量PCR(qRT-PCR)
4 培养条件优化
4.1 撤除1个因子的培养条件
4.2 验证IY条件对维持mEpiSCs的作用
5 筛选目的基因
5.1 分条件培养细胞
5.2 Microarray(基因芯片)分析
5.3 筛选目的基因
6反向验证Foxd3与IWR1的相关性
6.1 分条件刺激细胞
6.2 qRT-PCR检测Foxd3的表达
7 在上胚层干细胞中过表达Foxd3
7.1 构建过表达载体系统
7.2 建立稳定的过表达细胞系
7.3 去IWR1条件下培养Foxd3过表达细胞
8 在上胚层干细胞中下调Foxd3
8.1 构建针对目的基因的pLKO.1慢病毒载体
8.2 包装病毒颗粒
8.3 建立稳定的Foxd3-shRNA细胞系
8.4 Foxd3-shRNA细胞状态检测
第三章 结果
1.mEpiSCs的获取
2 培养条件优化
3 Microarray分析与靶基因筛选
4 Foxd3与IWR1相关性验证
5 Foxd3稳定表达细胞系的建立
6 去IWR1条件下培养Foxd3过表达细胞
7 Foxd3稳定干扰细胞系的建立
8 下调Foxd3对上胚层干细胞的影响
第四章 讨论
附录
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文