SD大鼠胚胎上胚层干细胞的分离与培养

摘要

获取SD大鼠胚胎中附植后的胚胎上胚层干细胞(post-implantation Epiblast stem cells,Episc),并对SD大鼠Episc(SDEpisc)分离与培养具有影响的组织来源、胎龄、细胞因子等条件进行探讨,从而探索适宜SD大鼠Episcs分离培养的实验体系,为下一步SD大鼠Episcs的建系提供实验研究基础.以昆明小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,分别取5.5日胎龄的囊胚和7.75日胎龄囊胚上胚层(Epiblast),于添加白血病抑制因子(leucocyte inbibitory factor,LIF)或活化素(activin)的基础培养基中,进行原代培养.传代培养则分别采用机械法和胰酶消化法对克隆集落进行.最后通过碱性磷酸酶染色对克隆集落进行鉴定分析,并检测其体外分化能力.结果显示，培养于LIF培养基和activin培养基中的囊胚均发生严重分化.培养于LIF的培养基中的Epiblast也发生了严重的自发分化.而在activin培养基中,Epiblast形成SDEpisc原代集落.经机械法传代获得AKP染色阴性、能形成拟胚体的SDEpisc.结论表明，利用细胞因子activin,结合机械传代法可从7.75日胎龄SD大鼠胚胎中获得SDEpisc.