抗氧化剂对重症急性胰腺炎大鼠胰腺高迁移率蛋白-1表达的影响及意义

摘要

目的： 研究重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)大鼠胰腺组织高迁移率蛋白-1(high mobility group box protein-1，HMGB1)表达的变化规律，以及抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(Pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)对重症急性胰腺炎大鼠胰腺高迁移率蛋白-1表达的影响及意义。 方法： Sprague-Dawley(SD)大鼠144只按完全随机设计分为3组：A组(48只)，为对照组：B组(48只)，为重症急性胰腺炎组；C组(48只)，为重症急性胰腺炎加吡咯烷二硫代氨基甲酸酯干预组。按术后1h、3h、6h、12h、24h、48h六个时间点，三组大鼠每时间点取8只。模型采用十二指肠壁穿刺经乳头逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠1ml/kg建立。A组开腹后，只行经乳头胆胰管穿刺未向胆胰管内注入任何液体，其余操作同B组。C组在造模前1h给予腹腔注射PDTC30mg/kg(PDTC粉末用生理盐水溶解制成1.5％的PDTC溶液)，余两组注入等量生理盐水。模型建立后，按上述时间点将生存动物麻醉后下腔静脉取血处死，留取腹水和血清，并取一部分胰腺组织置液氮过夜后，-70℃冰箱保存，另一部分经10％福尔马林固定，以制作石蜡切片。应用免疫荧光观察胰腺组织核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)的活化，免疫组化观察胰腺高迁移率蛋白-1(HMGB1)的表达。蛋白免疫印迹法(western blot)检测胰腺NF-κB的活性及HMGB1表达水平。组织匀浆酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测胰腺肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)水平。石蜡切片HE染色观察胰腺组织病理变化，并做病理评分，同时检测腹水量及血清淀粉酶(Amylase，AMY)水平。 结果： 1.免疫荧光显示，SAP时胰腺组织NF-κB显著活化，活化的NF-κB从胰腺腺泡细胞胞浆转移到细胞核内。western blot结果显示，B组胰腺组织NF-κB活性在术后1h即开始升高，3h达高峰，6～12h逐渐下降，但各时点与A组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。 2.组织匀浆ELISA法检测结果表明，B组胰腺 TNF-α于术后1h开始明显升高，6h达到高峰，12h即大幅下降，此后一直以较低水平维持至48h，但1～48h各时点均显著高于A组(P<0.05)。免疫组化显示：SAP时胰腺腺泡细胞及炎症细胞胞核、胞浆均含有棕黄色HMGB1，胰腺组织间质内亦可见棕黄色HMGB1。western blot显示：与A组相比，B组胰腺HMGB1水平于术后12h开始显著升高，24h达峰值，48h仍维持在较高水平(P<0.05)。 3.与B组相比，术后1h、3h、6h，C组胰腺组织NF-κB活性及TNF-α水平明显降低(P<0.05)；与B组相比，术后24h及48h，C组胰腺组织HMGB1水平亦显著降低(P<0.05)。 4.与A组相比，术后24h，B组胰腺组织病理评分、腹水量及血清AMY水平均显著增高(P<0.05)；而与B组比较，术后24h，C组胰腺组织病理评分、腹水量及血清AMY水平均明显降低(P<0.05)。 结论： 1.与TNF-α等早期炎症因子不同，SAP大鼠胰腺HMGB1表达升高较晚，但持续时间较长，HMGB1作为一种晚期炎症因子参与了SAP时胰腺组织的炎症损伤。 2.抗氧化剂PDTC可能通过抑制SAP大鼠胰腺NF-κB的活化，减少早期炎症因子TNF-α的转录表达，从而降低胰腺晚期炎症因子HMGB1的表达水平，改善胰腺组织的炎症损伤。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：全文缩略词表

声明

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

附录：硕士研究生期间完成的论文

致谢

综述 高迁移率族蛋白-1与重症急性胰腺炎相关性的研究进展