肾上腺髓质素2及其受体CRLR/RAMPs在肾性高血压大鼠的变化

摘要

[目的]:
　　通过0.30mm针灸针建立清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠肾性高血压动物模型。并研究小分子生物活性肽、CGRP家族肽新成员垂体中叶素(intermedin，IMD)/肾上腺髓质素2(adrenomedullin2，ADM2)及其受体降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor，CRLR)/受体活性修饰蛋白（receptor activitymodifying protein，RAMPs）系统的在两肾一夹肾性高血压发生、发展过程中的变化和可能的作用。
　　[方法]:
　　①两肾一夹(2K1C)高血压大鼠模型的建立:清洁级雄性SD大鼠18只，体重约180～220g，随机分为对照组和模型组。模型组行两肾一夹手术，对照组行假手术。8周后称重，用戊巴比妥钠(35mg/kg，i.p.)麻醉，左心导管插管法测定颈动脉收缩压(systolic blood pressure，SBP)，舒张压(diastolic bloodpressure，DBP)，平均颈动脉压(mean carotid arterial pressure，mCAP)、左室舒张末期压(Left ventricular end diastolic pressure，LVEDP)及左心室压力变化最大速率(Left ventricular±rate of left-ventricle pressure development,LV±dp/dtmax),并测定左心重（左心室加室间隔）与体重比值(left ventricular mass to bodyweight，LVM/BW)。光学显微镜观测心肌形态学的变化。
　　②主要采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR)方法测定心肌组织IMD/ADM2，和其CRLR/ RAMPs受体系统的信使核糖核苷酸(Messenger ribonucleic acid，mRNA)含量变化;
　　③采用免疫组织化学方法（immunohistochemistry，IHC）测定左心室心肌组织上IMD/ADM2的表达部位，并对其表达强度进行半定量分析;
　　④采用免疫印迹western-blot的方法测定心肌组织上的IMD蛋白的含量。
　　[结果]:
　　①与对照组相比:两肾一夹高血压组较对照组比较，SBP、DBP、mCAP分别上调了31％、24％、22％（P均＜0.01），而LVM/BW和LVEDP较对照组上调了12％和235％(P＜0.05，P＜0.01);同时LV+dp/dtmax上调了81％(P＜0.01)，而LV-dp/dtmax上调了25％(P＜0.01)。
　　②两肾一夹高血压组较对照组相比，大体心肌标本呈向心性肥厚，乳头肌和肉柱增粗变圆，但左心室腔不扩大甚至略缩小。
　　③光镜下高血压组较对照组相比，可见心肌细胞变粗，变长，有较多分支，细胞核大而深染。
　　④模型组左心室组织IMD、CRLR、RAMP1、RAMP2、RAMP3的mRNA表达较对照组分别上调146％(P＜0.01)、64％(P＜0.01)、76％(P＜0.05)、28％(P＜0.05)及14％(P＜0.05);
　　⑤左心室组织IMD免疫组化的累积光密度显示模型组较对照组增高95％(P＜0.01)，而且主要发布在心肌细胞的细胞核，炎症细胞，中小动脉的内皮细胞上，心肌胞浆也有不同程度的表达，大动脉的平滑肌细胞核上也有少量表达;
　　⑥ Western-blot检测左心室组织IMD蛋白和α tubulin的光密度(opticaldensity，OD)比值显示模型组较对照组上调134％(P＜0.01)。
　　[结论]:
　　通过0.30mm针灸针放置肾动脉上，用手术缝线结扎法，成功建立了大鼠肾性高血压的动物模型，而且早期即可引起心肌肥厚，适合研究高血压致心肌肥厚的发生机制。本模型具有高血压形成率高，存活率高，抵达高峰后血压稳定，波动小，而且更简便，经济实用。
　　上述结果均证实IMD/ADM2在肾性高血压大鼠的心肌内基因表达上调及蛋白合成增加，其受体CRLR/RAMPs mRNA表达亦相应地上调，提示IMD/ADM2在肾性高血压致心肌肥厚的过程中具有重要的调控意义。

目录

中英文缩略词表

摘要

引言

第一部分：肾性高血压模型的建立及验证

1．材料和方法

2．结果

3．分析和讨论

4．小结

第二部分：肾上腺髓质素2及其受体CRLR／RAMPs系统在肾性高血压变化的研究

材料和方法

结果

分析和讨论

小结

参考文献

个人资料

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致谢

文献综述 Intermedin／adrenomedullin2的研究进展

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