吸烟相关剂量镉对糖尿病大鼠肾脏作用的蛋白质组学研究

摘要

目的：
　　 本实验应用蛋白质组学技术,探讨吸烟相关剂量镉(CSR-Cd)加速糖尿病大鼠肾脏病变进程的作用机制。
　　 方法：
　　 实验动物分为4组,(1)正常组(N)；(2)正常+Cdcl2组(N+Cdcl2)；(3)糖尿病组(DM)；(4)糖尿病+Cdcl2组(DM+Cdcl2)。动物饲养12周后,收集尿液测微量白蛋白,取血清测镉含量,取左肾做病理切片,右肾提取蛋白样品。采用双向凝胶电泳技术建立实验组与对照组的蛋白质组差异性表达图谱,选择差异表达量相差2倍以上的蛋白质作为备选的目标蛋白质,采用MALDI-TOF质谱仪进行肽链指纹图谱分析。
　　 结果：
　　 1.N+Cdcl2组和DM+Cdcl2组大鼠血清镉浓度分别为1.23±0.36μg/μl、1.11±0.24μg/μl,将造成血清此镉浓度的剂量定义为CSR-Cd。
　　 2.N+Cdcl2组与N组大鼠比较,尿微量白蛋白并无统计学意义；DM+Cdcl2组与DM组大鼠比较,尿微量白蛋白明显升高,具有统计学意义。
　　 3.使用ImageMaster'2D软件对双向电泳结果进行分析,N组与N+Cdcl2组无明显差异点,DM+Cdcl2组与DM组相比,组间匹配显示蛋白表达量相差2倍以上的斑点有43个。
　　 4.对43个差异蛋白进行MALDI-TOF质谱分析,鉴别出26个有意义的蛋白。
　　 结论：
　　 1.CSR-Cd对正常大鼠肾脏无明显损伤,但能加速DM大鼠肾脏病变进程。
　　 2.双向电泳技术能够对大鼠肾脏蛋白进行有效的分离并获得差异蛋白。
　　 3.经质谱鉴定,确证26个目标蛋白质斑点,其中有与抗氧化相关的蛋白、能量相关蛋白、参与尿素循环相关的蛋白等,推测其可能参与CSR-Cd对糖尿病大鼠肾脏损伤,为深入研究CSR-Cd加速糖尿病大鼠肾脏病变进程提供了条件。