HPV感染状态下宫颈鳞癌患者血清MGMT启动子甲基化状态研究

摘要

目的：研究宫颈鳞癌患者外周血清中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-Methylguanine-DNAMethyltransferase，MGMT)基因启动子区域5’-CpG岛甲基化状态，探讨MGMT基因启动子甲基化与高危人乳头瘤病毒(highriskHumanpapillomavirus，hr-HPV)感染之间的关系。
　　 方法：选取浙江省肿瘤医院2006年1月至2007年12月期间新发宫颈鳞癌183例。患者年龄22-78岁，无其他恶性肿瘤病史及家族恶性肿瘤病史，现无妊娠，均经宫颈活检确诊，取标本前均未接受放化疗治疗。
　　 患者平均年龄(46.88±10.35)岁。其中临床分期按照FIGO分期为Ⅰ期87例，Ⅱ期88例，Ⅲ期8例，Ⅳ期0例。WHO病理分级高分化113例，中分化44例，低分化26例。治疗前用特制宫颈刷采集宫颈脱落细胞，采用凯普导流杂交技术及其配套试剂（潮州凯普生物化学有限公司提供），对13种hr-HPV基因型进行分型检测，包括HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68），根据HPV检测结果分组进行研究。其中HPV阳性117例，阴性66例。单一型HPV感染101例，二重感染9例，三重感染7例。单一感染中，HPV16型感染67例，52型感染8例，59型感染5例，18型、31型、45型、58型、68型感染各4例，33型1例。
　　 治疗前采取患者外周静脉血4ml，静置凝固后取上层血清，再12，000×g，4℃离心6min，取上层血清液-70℃保存待检。采用定量甲基化特异性聚合酶链式反应(quantitativemethylationspecificpolymerasechainreaction，qMSP)检测患者外周血清DNA中MGMT基因启动子区域5’-CpG岛甲基化状态，并分析其与hr-HPV感染，HPV各亚型及多重感染之间的关系。
　　 结果：
　　 ①宫颈鳞癌患者外周血清中MGMT基因启动子区域5’-CpG岛甲基化的发生率为45.35％。
　　 ②伴有hr-HPV感染的宫颈鳞癌患者有70.9％发生了MGMT基因启动子区域5’-CpG岛甲基化，而在hr-HPV阴性的宫颈鳞癌患者中没有1例发生甲基化。hr-HPV阳性组的甲基化率明显高于阴性组(P＜0.001)。
　　 ③在单一hr-HPV感染宫颈鳞癌患者中MGMT基因启动子区域5’-CpG岛甲基化率为65.3％，在多重感染患者中，为87.5％，多重感染者甲基化率及单一感染患者甲基化率高于无感染者(P＜0.001)，但多重感染者与单一感染者之间没有明显差异(P＞0.05)。
　　 ④HPV16型感染者MGMT基因启动子区域5’-CpG岛的甲基化率为97.0％，明显高于52型及其他类型的感染者(P＜0.001)。
　　 结论：
　　 ①MGMT基因启动子区域5’-CpG岛甲基化是宫颈鳞癌患者外周血清DNA的常见现象。
　　 ②MGMT基因启动子区域5’-CpG岛甲基化与hr-HPV感染有密切的关系，与HPV感染的亚型有关，与是否多重感染无关。