脉冲电场促进宫颈癌HeLa细胞摄取光敏剂的实验研究

摘要

目的：
　　 在细胞水平探索脉冲电场对人宫颈癌HeLa细胞摄取光敏剂二氢卟吩E6及其99mTc标记物99mTc-E6的促进作用。方法：
　　 1．通过细胞毒性试验比较单纯光动力治疗与脉冲电场联合光动力治疗对人宫颈癌HeLa细胞的杀伤效应。
　　 2．普通荧光显微镜及激光共聚焦显微镜半定量比较脉冲电场处理人宫颈癌HeLa细胞前后细胞内二氢卟吩E6含量的变化。
　　 3．流式细胞术检测人宫颈癌HeLa细胞内荧光强度，定量比较脉冲电场处理宫颈癌HeLa细胞前后细胞内荧光强度的变化。
　　 4.99mTc标记二氢卟吩E6，制成99mTc-E6标记物，利用放射活度检测仪测定其标记率、稳定性及脉冲电场处理前后人宫颈癌HeLa细胞内放射性活度的变化。
　　 结果：
　　 1．通过细胞毒性试验，脉冲电场联合光动力治疗对人宫颈癌HeLa细胞的杀伤效应明显高于单纯光动力治疗。
　　 1.1.脉冲电场对宫颈癌HeLa细胞有杀伤效应，作用时间越长，杀伤力越大，其半数致死时间约在40秒附近。
　　 1.2．二氢卟吩E6介导的光动力治疗对宫颈癌HeLa细胞有杀伤效应，二氢卟吩E6浓度越大，杀伤力越大，其半数致死浓度为20ug/ml；作用时间越长，杀伤力越大，其半数致死时间为8分钟。
　　 1.3.在光照时间不变的条件下，给予相同浓度的二氢卟吩E6，实验组（脉冲电场联合光动力治疗）与对照组（光动力治疗）相比，细胞杀伤曲线左移，前者对宫颈癌HeLa细胞的杀伤效应比后者强30％；要达到相同杀伤力，前者需要的二氢卟吩E6用量只占后者的1/3。
　　 1.4.在二氢卟吩E6浓度不变的条件下，给予相同光照时间，实验组（脉冲电场联合光动力治疗）与对照组（光动力治疗）相比，细胞杀伤曲线左移，前者对宫颈癌HeLa细胞的杀伤力是后者的2倍。要达到相同的杀伤力，前者所需要的照射时间只占后者的1/4。
　　 2．通过IPP6.0软件分析比较普通荧光显微镜及激光共聚焦显微镜下图片，得出实验组（二氢卟吩E6+脉冲电场）IOD/Area明显低于对照组（二氢卟吩E6），即实验组宫颈癌HeLa细胞内荧光亮度明显高于对照组组。
　　 2.1.普通荧光显微镜下结果：通过IPP软件分析，实验组IOD/AREA=242.44:对照组IOD/AREA=249.52；空白组IOD/Area=250.09。比值越大，灰度越高，故实验组细胞内荧光亮度高于对照组。
　　 2.2.激光共聚焦显微镜下结果：通过IPP软件分析，实验组IOD/Area=238.93:对照组IOD/Area=246.35；空白组IOD/Area=250.06。比值越大，灰度越高，故实验组细胞内荧光亮度高于对照组。
　　 3．通过流式细胞术对宫颈癌HeLa细胞内荧光强度的检测，实验组（二氢卟吩E6+脉冲电场）细胞内的平均荧光强度为503.31±26.85，而对照组（二氢卟吩E6）细胞内的平均荧光强度仅为90.91±9.07，空白组平均荧光强度为1.83±0.25，方差分析有显著性差异(P＜0.001)，定量分析显示实验组细胞内平均荧光强度约为对照组的5.5倍，脉冲电场显著提高了HeLa细胞对光敏剂的摄取。
　　 4.二氢卟吩E6能够被99mTc标记，其标记物99mTc-E6在脉冲电场的作用下对宫颈癌HeLa细胞的渗透率显著提高。
　　 4.1.99mTc对二氢卟吩E6的标记率达93％。
　　 4.2.标记物99mTc-E6的稳定性并不随时间的延长而下降。
　　 4.3.实验组（99mTc-E6+脉冲电场）宫颈癌HeLa细胞内放射性活度占总放射性活度的7.6％，对照组（99mTc-E6）细胞内放射性活度占总放射性活度的1.9％，即脉冲电场可将宫颈癌HeLa细胞对99mTc-E6的摄取提高4倍。
　　 结论：
　　 1．脉冲电场能够显著促进宫颈癌HeLa细胞摄取二氢卟吩E6。
　　 2．二氢卟吩E6能够被99mTc标记，其标记物99mTc-E6具有良好的稳定性。在脉冲电场的作用下宫颈癌HeLa细胞对99mTc-E6的摄取明显增强。