霍山石斛食用安全性评价及其多糖生化特性季节性变化研究

摘要

霍山石斛作为我国传统的药食兼用中药材，具有悠久的食用历史。本文通过急性经口毒性实验、三项遗传毒性试验、90天经口毒性试验、致畸试验和卫生学试验对霍山石斛（人工栽培）主要食用部位茎(DHS)进行了安全性评价，并考察了霍山石斛茎主要活性成分——多糖生化特性的季节性变化规律。　　论文研究取得以下主要结果:　　(1)急性经口毒性试验表明霍山石斛茎对于雌雄小鼠的最大耐受剂量(MTD)均大于15.0 g/kg.bw。　　(2) Ames试验结果判断为致突变阴性，即霍山石斛茎对鼠伤寒沙门氏菌四株试验菌株(TA97、TA98、TA100、TA102)均未呈现遗传毒性。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验表明，霍山石斛茎各剂量组对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及嗜多染红细胞与正染红细胞(PCE/NCE)的比值均无影响。霍山石斛茎各剂量组小鼠精子畸形率为1.82％～1.90％，与阴性对照组(1.76％)相比无显著性差异。　　(3)90天喂养试验表明，霍山石斛茎各剂量组与阴性对照组相比，动物的体重、体重增加量、进食量、食物利用率、脏器绝对重量、脏/体比值、血液学指标及血液生化指标均无显著性差异;病理组织学检查显示，霍山石斛茎对受检脏器无明显损害。　　(4)致畸试验表明，霍山石斛茎各剂量组对孕鼠体重增长、胚胎早期发育及胎鼠的生长发育、胎鼠的骨骼、内脏和外观发育均无明显不良影响。　　(5)卫生学试验表明，霍山石斛茎中有机氯农药（六六六、滴滴涕）残留量，重金属（铅、镉、汞、砷、锡、镍）含量及微生物指标（菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌）均符合国家相关标准规定。　　(6)多糖生化特性季节性变化研究表明，多糖的生化特性与季节性变化密切相关。多糖含量呈现出冬季高于夏季的整体趋势，1月份多糖含量最高(40.107 g/100 g干重)，8月份多糖含量最低（20.093 g/100 g干重）;多糖粘度的变化趋势与含量变化趋势相似，12月份多糖粘度最大（0.430 dl/g干重），8月份多糖粘度最小（0.228 dl/g干重）;多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成，其摩尔比在不同季节各不相同，介于1.93∶1.00和3.18∶1.00之间;不同季节的多糖均具有调节肠黏膜免疫的活性，采自当年11月至翌年4月的霍山石斛的多糖，其肠黏膜免疫调节活性整体上高于采自5-10月霍山石斛的多糖。　　综上研究，霍山石斛茎（人工栽培）安全无毒，当以多糖的生化特性为采收标准时，其最佳采收期为当年11月至翌年4月，上述研究结果将为霍山石斛新食品原料的申报奠定基础。

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摘要

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一 绪论

1．1 霍山石斛食用考证

1．2 霍山石斛食用安全性评价

1．2．1 安全性评价概述

1．2．2 石斛安全性评价研究

1．3 霍山石斛多糖化学结构研究进展

1．4 霍山石斛及其多糖的药理活性研究进展

1．4．1 免疫调节作用

1．4．2 保肝功效

1．4．3 抗氧化作用

1．4．4 降血糖功效

1．4．5 抗肿瘤活性

1．4．6 其他作用

1．5 本论文研究的目的及主要内容

1．5．1 本论文研究的目的

1．5．2 本论文研究的主要内容

二 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验试剂

2．3 主要仪器

2．4 霍山石斛样品处理

2．5 小鼠急性毒性实验

2．6 遗传毒性试验

2．6．1 Ames试验

2．6．2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

2．7 90天经口毒性试验

2．8 致畸试验

2．8．1 相关试剂配制

2．8．2 动物处理及情况观察

2．8．3 孕鼠处死和检查

2．8．4 活胎鼠检查

2．8．5 胎鼠骨标本的制作与检查

2．8．6 胎鼠内脏检查

2．9 重金属含量分析

2．10 有机氯农药残留分析

2．11 微生物学检验

2．11．1 菌落总数测定

2．11．2 沙门氏菌检验

2．11．3 金黄色葡萄球菌检验

2．11．4 霉菌和酵母检验

2．11．5 大肠菌群检验

2．12 霍山石斛多糖理化性质分析

2．12．1 多糖含量分析

2．12．2 特性粘度测定

2．12．3 单糖组成分析

2．13 霍山石斛多糖肠道粘膜免疫活性评价

2．14 数据处理

三 结果与讨论

3．1 小鼠急性经口毒性试验结果

3．2 遗传毒性实验结果

3．2．1 Ames试验

3．2．2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

3．2．3 小鼠精子畸形试验

3．3 90天经口毒性试验

3．3．1 霍山石斛茎对大鼠体重和食物利用率的影响

3．3．2 霍山石斛茎对大鼠血液学指标的影响

3．3．3 霍山石斛茎对大鼠血液生化指标的影响

3．3．4 霍山石斛茎对大鼠病理学结果

3．4 致畸试验

3．5 卫生学实验

3．6 霍山石斛多糖理化性质分析

3．7 霍山石斛多糖肠道粘膜免疫活性分析

四 结论

4．1 急性经口毒性试验

4．2 三项遗传毒性试验

4．3 90天经口毒性试验

4．4 致畸试验

4．5 卫生学检验

4．6 多糖生化特性分析

参考文献

攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况