MK2通过β-TrCP泛素连接酶促进Tfcp2l1降解来调控小鼠胚胎干细胞自我更新的研究

目录

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符号说明

第一章 前言

1.1 胚胎干细胞简介

1.2 mESCs中的经典通路:LIF/STAT3信号通路

1.3 Tfcp2l1目前的研究进展

1.4 泛素化介绍

1.5 研究目的和意义

第二章 实验材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.2.1 小鼠胚胎干细胞的培养

2.2.2 细胞的传代

2.2.3 细胞的冻存

2.2.4 细胞的复苏

2.2.5 质粒构建

2.2.6 稳定细胞系的获得

2.2.7 免疫印迹实验(Western bloting）

2.2.8 免疫共沉淀(CO-IP)

2.2.9 qRT-PCR实验步骤

2.2.10 碱性磷酸酶染色

第三章 实验结果

3.1 在mESCs中，筛选直接调控Tfcp2l1蛋白稳定性的基因

3.1.1 初步验证调控Tfcp2l1蛋白的基因

3.1.2 反向验证β-TrCP1对Tfcp2l1蛋白的调控作用

3.1.3 鉴定β-TrCP2对Tfcp2l1的调节作用

3.2 验证β-TrCP1与Tfcp2l1蛋白间的相互作用

3.2.1 检测野生型与突变型Tfcp2l1与β-TrCP1的结合强弱

3.2.2野生型与突变型Tfcp2l1的泛素化

3.3 MK2与Tfcp2l1相互作用促进Tfcp2l1磷酸化和降解

3.3.1 MK2负调控Tfcp211蛋白的表达

3.3.2 MK2与Tfcp2l1相互作用

3.4.β-TrCP和MK2介导的Tfcp2l1降解对mESCs自我更新的影响

3.4.1 共表达Tfcp2l1与β-TrCP对mESCs自我更新的影响

3.4.2不同条件下过表达MK2对小鼠胚胎干细胞的影响

第四章 讨论与展望

参考文献

附录（附表）

攻读学位期间发表的学术论文

致谢