电离辐射反应中PML调控人肺腺癌A549细胞IL-6的表达及其介导的细胞旁效应

摘要

电离辐射反应中,PML调控人肺腺癌A549细胞IL-6的表达及其介导的细胞旁效应　　目的:通过研究早幼粒细胞白血病蛋白PML在人肺腺癌A549细胞中对辐射诱导的促炎细胞因子的表达影响以及PML-IL-6信号途径是否调控肿瘤细胞神经内分泌分化标志性分子:神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,初步探讨PML在肿瘤辐射旁效应中的功能。方法:利用IF、qRT-PCR、ELISA、Western-blot、CCK-8、抗体中和试验等方法检测辐照后的A549细胞中的PML激活情况;PML是否参与多种促炎细胞因子(包括IL-6、IL-8)的表达调控;PML是否调控受照细胞培养上清中IL-6、IL-8的分泌量;以及PML是否调控受照细胞和旁细胞中神经内分泌分化标志性酶NSE的表达和对肿瘤细胞的增殖。结果:A549细胞在10Gy辐照后,PML-NB的数量迅速增加,PMLmRNA和蛋白的表达在照后72小时明显上调。10Gy剂量γ射线辐照后72小时,A549细胞中IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、TGF-β和TNF-α等9种细胞因子mRNA表达上调;敲低PML的A549细胞中,辐射诱导的IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等4种炎性细胞因子mRNA表达上调被显著抑制。辐照引发剂量和时间依赖的IL-6、IL-8mRNA的表达上调,在10Gy辐照后72小时,IL-6、IL-8mRNA的表达达到最高峰,敲低PML后,IL-6、IL-8mRNA的表达上调受到明显的抑制;ELISA检测结果进一步证实,PML敲低组A549细胞中辐射诱导的IL-6、IL-8分泌上调明显减弱,PML敲低组细胞的IR-CM所引发的旁细胞增殖抑制和IL-6介导的NSE表达抑制均明显低于对照组。结论:在电离辐射反应中,激活的PML参与调控多种辐射诱导的细胞因子的表达,进而参与调控辐射诱导的细胞旁效应。本研究揭示了PML参与辐射反应中细胞间信号传递和肿瘤微环境调控的新信号途径。　　肿瘤细胞中Ro60的表达及其对肿瘤细胞辐射敏感性的影响　　目的:检测肿瘤细胞中RNA结合蛋白Ro60的表达定位,研究Ro60在肿瘤增殖和辐射敏感性中的作用,初步分析Ro60在胃癌组织中的表达与p53的关系。方法:用Ro60真核表达载体转染肿瘤细胞,观察电离辐射引发的DNA损伤反应中Ro60的表达定位规律;CCK-8和台盼蓝染色实验检测Ro60蛋白对肿瘤细胞增殖和辐射敏感性的影响;qRT-PCR检测胃癌患者组织样本中Ro60与p53mRNA的表达情况。结果:γ射线诱导的DNA损伤反应中Ro60发生显著的表达上调和亚细胞定位改变;过表达Ro60的肿瘤细胞增殖延缓,细胞死亡明显增多,辐射引发的细胞增殖抑制和死亡显著增强;在所检测的39例胃癌组织样本中,Ro60的表达与p53存在显著关联,12例Ro60mRNA低表达的胃癌样本中p53mRNA也同样低表达。结论:辐射引发肿瘤细胞中Ro60表达和定位改变,调控肿瘤细胞增殖和凋亡,提高肿瘤细胞的辐射敏感性。胃癌患者中Ro60与p53的表达存在一定的相关性。

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英文摘要

电离辐射反应中，PML调控人肺腺癌A549细胞IL-6的表达及其介导的细胞旁效应

1 前言

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 实验结果

3.1 A549细胞辐照后， PML被激活并参与调控辐射诱导的多种炎性细胞因子的表达

3.2 电离辐射激活肿瘤细胞及正常细胞中IL-6、IL8 mRNA的表达

3.3 PML在mRNA水平参与调控电离辐射对IL-6、IL-8的诱导表达

3.4 PML敲低表达抑制辐射诱导的细胞上清中IL-6、IL-8蛋白量的增加

3.5 PML参与A549细胞的增殖调控

3.6 PML-IL-6途径调控NSE的表达

4 讨论

5 结论

参考文献

中文摘要

英文摘要

肿瘤细胞中Ro60的表达及其对肿瘤细胞辐射敏感性的影响

1 前言

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 IR引发的DNA损伤反应中肿瘤细胞内Ro60发生细胞核聚集

3.2 Ro60调控肿瘤细胞增殖，死亡及辐射敏感性

3.3 胃癌组织中Ro60与p53的表达相关性初步分析

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述