HB199在食蟹猴体内的药代动力学、毒代动力学及免疫原性研究

摘要

HB199是艾塞那肽与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白，属于一类新药，临床上用于治疗糖尿病。本文主要研究食蟹猴皮下注射 HB199的药代动力学、毒代动力学及免疫原性，为临床应用提供科学依据。
　　1.建立了特异、灵敏、可靠的酶联免疫法（EIA法）用于测定血清中HB199及艾塞那肽的浓度并进行方法确证，结果符合生物样品分析的要求。
　　2.研究了HB199在食蟹猴体内的药代动力学，并同对照药艾塞那肽进行比较。实验分为低、中、高（0.1、0.3、0.9 mg/kg）三个受试组、一个对照组（0.1 mg/kg）及一个多次给药组（0.3 mg/kg），每组各3雌3雄，皮下注射给药，低、中、高剂量组及对照组为单次给药，多次给药组每周给药1次，共4次。用确证的EIA法检测食蟹猴皮下注射HB199的血药浓度，用非房室模型拟合药时曲线、计算动力学参数，并与注射同剂量艾塞那肽的药动参数进行比较。结果显示 HB199食蟹猴单次皮下给药（0.1~0.9 mg/kg）、多次皮下给药（0.3 mg/kg）及艾塞那肽单次皮下给药（0.1 mg/kg）的药代参数组内无显著的雌雄差异；在0.1~0.9 mg/kg剂量范围内，随剂量增加，药时曲线下面积AUC(0-15d)和达峰浓度Cmax增加的比例略低于剂量增加的比例，消除半衰期t1/2基本不变（4.59~5.66 d），清除率CL略微增加；与皮下注射艾塞那肽比较，食蟹猴皮下注射HB199可延长消除半衰期，从而达到减少给药频率的目的；食蟹猴每7天1次，连续4次皮下注射给药，AUC第4次/AUC首次（7d计算）为1.45（P<0.05）。
　　3.研究了HB199在食蟹猴体内的毒代动力学及免疫原性，实验分为阴性对照组、低、中、高剂量组（0、0.75、1.5、3 mg/kg），皮下注射给药，每组各4雌4雄，每周给药1次，共给药5次，恢复期28天。毒代动力学研究：用确证的EIA法检测低、中、高剂量组全部动物首次至第4次皮下注射HB199的血药浓度，用非房室模型计算动力学参数，通过AUC等毒代参数的分析解释药物在体内的暴露量，结果显示在0.75~3 mg/kg剂量范围内，食蟹猴皮下给药第1周（第1次）和第4周（第4次）的毒代参数 AUC(0-7d)和 Cmax随剂量成比例增加；食蟹猴单次或多次给药未出现明显的雌雄差异；在0.75~3 mg/kg剂量范围内多次给药，低、中、高剂量抗体检测结果显示第3次给药后2天或第5次给药后2天抗体滴度小于1/2000的动物（比例为20/24）， AUC第4次/AUC首次为1.47~1.72(P﹤0.05)；第3次给药后2天及第5次给药后2天抗体滴度均达到1/2000的动物(比例为4/24)，AUC第4次/AUC首次在0.21~1.07之间。免疫原性研究：采用间接酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗药抗体，以给药前32份食蟹猴血清的平均吸光度值（OD值）的2.1倍作为阳性判断阈值来确定各动物血清中抗体是否为阳性，结果显示第3次给药后2天，在1:50血清稀释时，低、中、高三个剂量组产生抗体阳性动物比例分别为1/8、5/8、5/8，各组抗体阳性动物血清样本的最大稀释度分别为1:2000、1:50~1:2000、1:50~1:2000；第5次给药后2天，在1:50血清稀释时，低、中、高三个剂量组产生抗体阳性动物比例分别为7/8，8/8，6/8，各组抗体阳性动物血清样本的最大稀释度分别为1:50~1:2000、1:50~1:2000、1:50~1:2000;恢复期第28天，在1:50血清稀释时，低、中、高三个剂量组产生抗体阳性动物数分别为3/4，3/4，3/4，各组抗体阳性动物血清样本的最大稀释度分别为1:50~1:2000、1:50、1:50~1:1000。与第5次给药后2天相比，多数抗HB199抗体滴度保持不变或有所下降，表明HB199食蟹猴皮下给药5周产生一定的免疫原性。

目录

声明

前言

第一部分 生物样品中HB199/艾塞那肽EIA测定方法的建立

1. 仪器与材料

2. 实验方法

3. 结果

4. 讨论

5. 结论

第二部分 HB199在食蟹猴体内药代动力学研究

1. 仪器与材料

2. 实验动物

3. 实验方法

4. 结果

5. 讨论

6. 结论

第三部分 HB199在食蟹猴体内的免疫原性研究

1. 仪器与材料

2. 实验动物

3. 实验方法

4. 结果

5. 讨论

6. 结论

第四部分 HB199在食蟹猴体内的毒代动力学研究

1. 仪器与材料

2. 实验动物

3. 实验方法

4. 结果

5. 讨论

6. 结论

研究总结

参考文献

综述:胰高血糖素样肽-1受体激动剂的研究进展

中英文缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致谢