人源肝癌组织原位荷瘤小鼠模型的建立与应用

摘要

原发性肝细胞癌是一种世界性的健康困扰，每年因之而致死的人数在所有癌症之中也高居前列。尤其在中国及东亚大多数地区，每年因乙型肝炎病毒的流行而引发肝炎，并最终导致肝细胞癌发生的病例数相当惊人。然而乙型肝炎病毒入侵机体后，如何引发肝脏的炎症-癌症的转化链的具体机制尚不明朗。
　　通过动物模型来对特定疾病进行研究，这是当前最有效的研究疾病发生发展过程的手段。因此，只有建立合适的动物模型，才能对肝癌进行深入的研究。但是，目前广泛使用的利用肝癌细胞系对动物进行建模的方法有其缺陷。因为细胞系在长期体外传代的过程中，已经丧失了一些临床上肝细胞癌的特性，故而难以全面地反映病人的真实生理状态。笔者在对前人工作进行分析总结后，通过使用人来源的肝癌组织对免疫缺陷的小鼠进行荷瘤建模，并最终构建起病人来源的肿瘤组织肝原位的荷瘤小鼠模型用于后续研究。这样构建起来的人源肝癌组织原位荷瘤小鼠，可以进行肝癌发生发展的机制研究，并可以用于新型药物筛选以及新型治疗手段的探究。
　　本项研究中，笔者研究了人源肿瘤组织原位移植瘤荷瘤小鼠的构建方法以及该模型的应用价值。
　　首先，本文将病人来源的新鲜肝癌组织处理后，向非肥胖型糖尿病重症联合免疫缺陷缺陷(NOD-SCID)小鼠皮下注射的方法，筛选可以在小鼠体内嵌合生长的肿瘤组织。收获肿瘤组织，将之在后续NOD-SCID小鼠皮下传代三代。此后，收获肿瘤组织向后续小鼠肝内进行荷瘤尝试，筛选出能成功荷瘤的小鼠，收获组织继续进行荷瘤建模。同时，收获肿瘤组织用于组织学检验，以确定其与所来源的病人肿瘤组织的相似性。结果表明笔者成功建立了一例人源肝癌组织的肝原位荷瘤小鼠模型，并且对于其肿瘤组织进行了病理学鉴定，证明了其与所来源的病人组织的相似性。
　　在上述动物模型中，待肿瘤组织传经多代性质稳定后，研究了其在筛选药物与新兴免疫治疗方面的应用。本文使用了临床常用的抗癌药物索拉菲尼(Sorafenib)采用每千克体重每天40毫克的剂量，对肝内荷瘤三周后的原位移植瘤嵌合体模型小鼠给药。治疗三周后，观察到小鼠肝内肿瘤生长被显著抑制。
　　细胞生物治疗是目前国际研究热点。笔者采用了人自然杀伤(Natural Killer,NK)细胞的细胞系NK92细胞和NKG细胞分别对肝原位移植瘤嵌合体模型小鼠给于腹腔注射1×107个NK92(或NKG)细胞;每周3次，共计8次的NK细胞免疫治疗，以观察新型的细胞治疗方法对荷瘤小鼠是否存在一定的治疗作用。结果表明在NK92细胞的治疗肿瘤生长被显著抑制，但NKG治疗组未发现明显的肿瘤生长抑制现象。
　　上述结果提示本文构建的肝原位移植瘤嵌合体模型为药物筛选、药效的观察以及新型疗法的探索提供了一个很好的平台。

目录

声明

摘要

图序

表序

第1章 绪论

1．1．1 原发性肝细胞癌危害及致病因素

1．1．2 慢性肝炎病毒感染与肝细胞癌

1．1．3 肝细胞癌的治疗策略与治疗前景

1．2．1 建立肿瘤动物模型的必要性

1．2．2 常见的肝细胞癌动物模型

1．2．2．1 化学试剂诱导肝细胞癌动物模型

1．2．2．2 肝细胞癌动物荷瘤嵌合体模型

1．2．2．3 遗传修饰的肝细胞癌动物模型

1．3 结语

第2章 人源肝癌组织原位荷瘤小鼠模型的建立与应用

2．1 引言

2．2 实验材料与方法

2．2．1 实验材料

2．2．2 实验器材

2．2．3 实验方法

2．3 实验结果

2．3．1 人源肿瘤组织荷瘤嵌合体模型构建

2．3．2 人源肿瘤组织荷瘤后小鼠状态监测

2．3．3 荷瘤嵌合体小鼠肿瘤组织病理检测

2．3．4 索拉菲尼治疗原位移植瘤动物模型

2．3．5 免疫细胞治疗原位移植瘤动物模型

2．4 讨论和总结

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间的主要研究成果