多花黄精中促GLP-1分泌活性多糖的筛选与结构分析

摘要

综合运用水提醇沉、透析、离子交换色谱和分子排阻色谱技术对多花黄精进行提取、分离，分别获得醇提物、水提物、水提醇溶物、水提醇沉物、总多糖和粗多糖(PCP)共六个组分，粗多糖PCP经DE52-Cellulose预溶胀型离子交换纤维素分离后获得的水洗糖PCP1、0.1M盐洗糖PCPS1、0.2 M盐洗糖PCPS2、0.3 M盐洗糖PCPS3、0.4 M盐洗糖PCPS4和0.5 M盐洗糖PCPS5共六个组分，以及水洗糖PCP1经Sephadex G-100凝胶柱纯化得到的均一多糖组分PCP11。
　　不同提取物对肠内分泌细胞L-细胞分泌GLP-1的影响结果表明，多糖是多花黄精促L-细胞分泌GLP-1的主要活性部位，PCP11为多花黄精多糖中的高活性组分。
　　理化性质测定表明，多花黄精多糖PCP11是相对分子质量为8547 Da的均一组分;通过钼酸铵比色法测定及GC分析发现，PCP11主要由果糖组成，含有少量葡萄糖;结构解析表明，PCP11中果糖以β-(2→1，6)-D-Fruf、β-(2→6)-D-Fruf、β-(2→1)-D-Fruf及β-(2→)-D-Fruf四种连接方式构成，而葡萄糖以α-D-(1→)Glcp形式与果糖链进行连接。

目录

声明

致谢

摘要

一 绪论

1．1 黄精多糖的研究进展

1．1．1 黄精多糖的优化提取

1．1．2 黄精多糖的化学结构

1．1．3 黄精多糖的药理活性

1．2 肠促胰素GLP-1的研究进展

1．2．1 肠促胰素的研究进展

1．2．2 GLP-1的研究进展

1．3 本论文研究的目的及主要内容

1．3．1 本论文研究的目的

1．3．2 本论文研究的主要内容

二 材料和方法

2．1 实验材料

2．2 主要试剂

2．3 主要仪器

2．4 实验方法

2．4．1 多花黄精不同组分的制备

2．4．2 多花黄精不同组分体外活性筛选评价

2．4．3 多花黄精高活性组分多糖PCP11的理化性质分析

2．4．4 多花黄精高活性组分多糖的结构解析

2．4．5 数据处理

三 结果与分析

3．1 多花黄精不同组分的制备

3．1．1 多花黄精不同提取组分的初步制备

3．1．2 多花黄精粗多糖PCP的初步分离

3．1．3 多花黄精水洗糖PCP1纯化

3．2 多花黄精不同组分的体外活性评价

3．2．1 NCI-H716细胞的生长曲线

3．2．2 多花黄精不同组分对NCI-H716细胞毒性的检测

3．2．3 多花黄精不同组分对NCI-H716细胞分泌GLP-1的影响

3．2．4 多花黄精高活性组分多糖PCP11细胞毒性及活性验证

3．3 多花黄精高活性组分多糖PCP11理化性质分析

3．4 多花黄精高活性组分多糖PCP11结构解析

3．4．1 果糖含量测定

3．4．2 傅里叶红外光谱(FT-IR)分析

3．4．3 糖腈乙酸酯衍生物测单糖组成分析

3．4．4 核磁共振波谱分析

四 讨论

五 结论

5．1 多花黄精的分离纯化

5．2 多花黄精各组分体外GLP-1分泌评价

5．3 多花黄精多糖PCP11的理化性质及结构解析

参考文献

攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况