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第一章 绪论
1.1 睾丸酮丛毛单胞菌的研究进展
1.1.1睾丸酮丛毛单胞菌
1.1.2 睾丸酮丛毛单胞菌降解类固醇的关键酶
1.2 基因敲除
1.3 凝胶迁移实验
1.4金纳米粒子光吸收特性及应用
1.5研究内容与展望
第二章 TetR基因敲除菌株的构建及其3,17β-HSD对睾丸酮的响应特性
2.1 实验材料
2.1.1 菌株及质粒
2.1.2 仪器与药品
2.1.3 主要试剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 TetR基因敲除的C.testosteroni突变菌株的构建
2.2.2 3,17β-HSD的表达和纯化
2.2.3 ELISA测定3,17β-HSD蛋白的表达
2.2.4 睾丸酮对突变菌株3,17β-HSD蛋白的诱导表达
2.2.5 突变菌株遗传稳定性
2.3 结果与分析
2.3.1 重组质粒和TetR基因敲除菌株的构建
2.3.2 3,17β-HSD的表达和纯化
2.3.3 3,17β-HSD蛋白表达量的标准曲线
2.3.4 睾丸酮对突变菌株3,17β-HSD的诱导效应
2.3.5 突变菌株的遗传稳定性检测
2.4 小结
第三章 TetR蛋白对3,17β-HSD表达调控位点的分析
3.1 实验材料
3.1.1 质粒和菌株
3.1.2 仪器与药品
3.1.3 主要试剂配制
3.2 实验方法
3.2.1 pET-15b-TetR基因表达载体的构建
3.2.2 TetR活性蛋白的提取
3.2.3 EMSA和金纳米粒子比色法测定TetR蛋白与DNA的相互作用
3.3 实验结果
3.3.1 重组质粒 pET-15b -TetR的鉴定
3.3.2 TetR活性蛋白的提取
3.3.3 EMSA试验分析TetR蛋白与DNA的相互作用
3.3.4 金纳米粒子比色法测定TetR蛋白与DNA的相互作用
3.4 小结
结论
参考文献
致谢
