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摘要
英文缩略语
第1章文献综述
1.1.2倍半萜活性成分生物合成途径解祈
1.1.3二萜性成分生物合成途径解析
1.1.4三萜活性成分生物合成途径解析
1.2萜类活性成分合成生物学研究进展
1.2.1青蒿素的合成生物学研究
1.2.2紫杉醇的合成生物学研究
1.2.3丹参酮的合成生物学研究
1.2.4人参皂苷的合成生物学研究
1.3雷公藤甲素生物合成途径解析及合成生物学研究进展
第2章雷公藤甲素二萜烯中间体的发现及其形成相关宿类合酶基困的克隆
2.1实验材料
2.1.1植物材料
2.1.2载体和菌株
2.1.3主要试剂
2.1.4主要仪器
2.2实验方法
2.2.1雷公藤悬浮细跑及培养基，植株不同组织部位代谢物分析
2.2.4雷公藤悬浮细胞总RNA提取
2.2.6雷公藤萜类合酶基因全长cDNA克隆
2.2.7雷公藤萜类合酶基因生物信息学分析
2.3实验结果
2.3.1雷公藤悬浮细胞选择性地富集雷公藤甲素和雷公藤红素
2.3.2证实miltiradiene为雷公藤甲素二萜烯中间体化合物
2.3.4雷公藤萜类合酶多重序列比对及进化树分析
2.4本章总结
第3章雷公藤甲素生物合成相关宿类合酶功能鉴定
3.1实验材料
3.1.1植物材料
3.1.2载体和菌株
3.1.3主要试剂
3.1.4主要仪器
3.2实验方法
3.2.1重组蛋白异源表达及体外酶促
3.2.2亚细跑定位
3.2.3基因表达分析
3.2.4酵母双杂
3.2.5酵母中共表达CPS1和MS
3.2.6CPS1、CPS4、MS体内功能研究
3.3实验结果
3.3.1萜类合酶体外活性表征
3.3.2萜类合酶亚细胞定位分析
3.3.3萜类合酶基因表达分析
3.3.5酵母中共表达CPS1和MS
3.3.6CPS1、CPS4、MS体内功能研究
3.4本章总结
第4章雷公藤NADPH-细胞色素P450还原酶基因克隆及功能研究
4.1实验材料
4.1.1载体和菌株
4.1.2主要试剂
4.1.3主要仪器
4.2.1雷公藤P450还原酶基因克隆
4.2.2不同组织部位表达分析
4.2.3体外功能表征
4.2.4与贝壳杉烯氧化酶组合验证CPR活性
4.3.1CPR基因克隆
4.3.2不同组织部位基因表达分析
4.3.3CPR体外功能表征
4.3.4与贝壳杉烯氧化酶组合验证CPR活性
4.4本章总结
第5章雷公藤甲素生物合成途径首个CYP450基因功能研究
5.1实验材料
5.1.2主要试剂
5.1.3主要仪器
5.2实验方法
5.2.1CYP450基因筛选
5.2.2候选CYP450基因干扰分析
5.2.3酵母工程菌构建
5.2.4CYP728B70体外酶活表征
5.2.5CYP728B70基因过表达分析
5.3实验结果
5.3.1CYP450基因策选
5.3.2候选CYP450基因干扰分析
5.3.3miltiradiene高产菌株构建
5.3.4CYP728B70催化产物制备及鉴定
5.3.5CYP728B70体外酶活表征
5.3.6CYP728B70酶基因过表达分析
5.4本章总结
第6章结论、创新点与展望
6.1结论
6.2创新点
6.3展望
参考文献
致谢
个人简历
