单核细胞趋化蛋白-1和NF-κB通路在心脏移植排斥反应中的作用

摘要

背景与目的：同种异体心脏移植是治疗终末期心脏疾患的最终有效手段，但目前患者的远期存活率仍不能使人满意。有研究显示，心脏移植术后1、3、5年生存率分别为84.5％、78.2％、72.5％，心脏移植物血管病(cardiac allograft vasculopathy,CAV)和心肌纤维化是导致移植心脏功能丧失的主要原因。因此找到一种能够有效抑制慢性排斥反应的方法是目前心脏移植研究的方向。趋化因子作为移植排斥反应中的关键因素，可特异性募集抗原递呈细胞(antigen presenting cell，APC)和T淋巴细胞到移植器官的组织内，激发并促进炎症进展，致使移植器官功能损害甚至丧失，是排斥反应过程中的一种重要介质。单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)属于趋化因子CC亚族成员，对T淋巴细胞和巨噬细胞发挥趋化作用，是导致炎症细胞浸润和移植器官纤维化的重要因子。NF-κB(nuclear factor of kappaB)可对多种细胞因子、趋化因子的表达进行调控，有研究表明，NF-κB通路在移植排斥中可能起着中枢调控者的作用。本研究通过应用吡咯二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithio carbamate，PDTC)特异性拮抗NF-κB通路，并检测移植心脏中MCP-1的表达，探讨单核细胞趋化蛋白-1在心脏移植排斥反应中的表达及意义，并研究NF-κB通路在其中发挥的作用。
　　方法：选取近交系SD大鼠为受者，Wistar大鼠为供者，采用“套管连接技术”行颈部心脏移植术。将SD大鼠随机分为4组，每组12只:A组（急性排斥组），受者未采用任何治疗;B组（CsA组），移植术后环孢霉素A(CsA)10mg/kg治疗受者，术后60～90d采集移植心脏;C组（免疫耐受组），采用Wistar大鼠脾细胞(SPC)和环磷酰胺(CP)预处理SD大鼠，14d后行颈部心脏移植术;D组（PDTC组），移植术后腹腔注射吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)100mg/kg，1次/d，连续15d。Masson染色观察移植心脏纤维化程度，免疫组化及Westernblotting检测MCP-1的表达。
　　结果：急性排斥组、CsA组、免疫耐受组和PDTC组移植心脏存活时间分别为(6.53±2.48)d、(93.51±20.07)d、(201.42±40.36)d和(142.37±24.64)d，PDTC组明显高于CsA组和急性排斥组(P＜0.05);纤维化百分比分别为急性排斥组（25.37±9.45）％、CsA组（81.74±8.53）％、免疫耐受组(43.19±6.36)％和PDTC组(63.50±6.94)％，PDTC组较CsA组纤维化程度明显减轻(P＜0.05)。急性排斥组、CsA组、免疫耐受组和PDTC组MCP-1表达的积分光密度（IOD）值依次为(1.86±0.23)、(1.58±0.16)、(0.57±0.15)及(1.16±0.28)，免疫耐受组明显低于其它3组，PDTC组显著低于急性排斥组和CsA组(P＜0.05)。
　　结论：MCP-1的表达与排斥反应程度呈正相关，测定MCP-1的水平可预测移植心脏的功能状况;抑制NF-κB通路可减少MCP-1表达，明显减轻心脏移植排斥反应。