突变型单核细胞趋化蛋白-1构建及其对单核细胞趋化蛋白-1的干预作用

摘要

目的构建表达N端2-8位氨基酸缺失的突变型单核细胞趋化蛋白-1(mMCP-1),并观察其对单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的干预作用。方法Megaprimer-PCR构建mMCP-1-pVAX1(pVMm)。以脂质体将pVMm转染真核细胞系C2C12,ELISA分析mMCP-1的表达情况。采用趋化实验分析mMCP-1对病毒性心肌炎小鼠外周血单个核细胞(PMNCs)的趋化活性及其对MCP-1的干预作用。结果①酶切和测序显示野生型MCP-1真核表达载体(pVM)和pVMm构建成功。pVMm在真核细胞C2C12中有效表达。②mMCP-1不具有趋化病毒性心肌炎小鼠PMNCs的活性。与单纯使用MCP-1相比,以不同浓度的mMCP-1和MCP-1同时行趋化实验,被趋化的细胞明显减少(P<0.01),25μg/LmMCP-1可阻断10μg/LMCP-1对病毒性心肌炎小鼠PMNC的趋化活性。结论小鼠MCP-1N端2-8位氨基酸决定其趋化活性。mMCP-1可用于干预MCP-1的作用。